Aula13 ACH5542 - Nucleotídeos e Ácidos Nucleicos

e a ch55 42 bioquímica 1 a sala será preparada com livro Princípios de bioquímica de lehninger 6ª edição capítulo 8 nucleotídeos e ácidos nucleicos nessas aulas serão abordados alguns dados básicos ação clix e em particular o enfoque vai ser em Estrutura dos ácidos nucleicos e um pouco da química dos ácidos nucleicos outras funções dos nucleotídeos as partes mais relacionada com sequenciamento de DNA e será visto em outras se plena em biologia molecular e e no livro lehninger figura 8.1 ele mostra a estrutura Geral de é um precursor de ácido úrico que é o nucleotide nucleotide

eles são e pensando em termos de blocos constituídos de uma base que pode ser pública ou Prime dica ligado covalentemente É uma ribose que está ligada a covalentemente a um grupo fosfato perceba que a base público permite que ele está ligado no carbono um linha da pentose e que no carbono 5 linha da pentose está ligado o grupo fosfato é isso aqui são estruturas Gerais de base pública e de base pirimídica então a base é pública ela similar com a molécula de Purina Então esse aqui moléculas de Purina todas as outras bases púricas Elas têm

essa carne no caso que seria adenina e guanina e citosina e timina são pirimidinas então elas tem mais a cara dessa molécula aqui que a pirimidina E essas moléculas tem uma numeração que lhe são próprias então a base da Purina o primeiro átomo aqui é esse nitrogênio e aí você começa a contar no sentido anti-horário um dois três quatro cinco seis e aí daqui no sentido horário 789 enapid Medina você tem também sido nem tirar um dois três quatro cinco seis então o que é importante lembrar aqui aqui na prime Dina esse daqui é o

nitrogênio um e na urina Esse é o nitrogênio 9 que apurou onde ocorre a ligação covalente com a pentose com a ribose 1 a figura 8.2 na figura 8.2 ele já mostra as modificações que essas bases tem as modificações na purina-pirimidina que permitem produzir as bases do DNA então aqui você ver O que é a adenina e guanina são derivados da penicilina a Oi e aí você vem aqui aqui eu tenho um nh2 e aqui eu tenho outros negadores lembra que isso daqui ele está expulso ao só vende podem interagir com água pode protonar a

fita Nossa naspolini desculpa e aqui nas pirimidinas eu tenho citosina timina e uracila que tá no RN a mas também é uma pirimidina então é parecido com a piridina daqui tal n9 e aqui tal N1 delas Observe que essa daqui também né eu tenho condições de interagir com a água por ponte de hidrogênio aqui e nesse nitrogênio aqui aqui também tem condições que você possa hidrogênio nesses outros átomos estão por ter nitrogênio e oxigênio nessas moléculas você já espera que elas possam fazer Pontes de hidrogênio é produtiva se a São determinantes da estrutura do DNA

E aí a tabela 8.1 e essa tabela 8.1 ela vai dar um pouco nome aos termos Então você tem bases o tipo por inibir Medina E aí você agrupa elas adenina e guanina são purinas citosina timina e uracila são pirimidinas Observe que aqui ele vai ele vai dar três tipos de moléculas nucleosídeo nucleotídeo e assino crepitam em qual assinou Clique você encontra esse no closed ou esse no.jo Na verdade nós nucleico você vai encontrar esse é o precursor das nucleico né então na ordem é primeiro você tem um nucleotídeo depois o núcleo Tide e depois

o ácido nucleico o nucleosídeo e ele é aquilo que você tem na ausência do grupo fosfato tão adenosina doxazosina doxazosina e free Fire e nucleotídeo quando eu já tenho um grupo fosfato percebe que todos eles Com Adição de fosfato eles têm sufixo ato adenilato guanilato City de lato time de lata Você tem uma ideia da razão é bom o fosfato ele dele derivado do ácido fosfórico então ele é ácido então é por isso que o ácido nucleico ele é um astro porque não derivado as suas fora então aquele aquela e vamos voltar aqui então é

isso daqui eu posso protonar eu posso colocar um próton aqui ele disse para outono então por isso que é o nucleotídeo que é o que tem um fosfato ele tem caráter as e o DNA ele é uma longa cadeia a Cida tá e agora e vamos para cá isso daqui é a figura 8.41 do livro Então essa figura ela vai adentrar um pouco mais nessa coisa da notação da gente viu nome eu poderia Na verdade até para o lado a tabela e mostrado só isso daqui né que acha que é mais útil é bom então

o que você tem em rosa é o nucleotídeo certo ele coloca aqui ó Rosa nucleotídeo bom e o que você tem no total é a molécula chamada nucleotídeo então nucleotídeos de oxi adenosina e esse é o nome desse núcleo sítio se eu coloco o fosfato agora o espaço a ser um ácido fraco e é um nucleotídeo de Oxi adenilato e ele dá mais informações aqui de Oxi adenosina cinco linha monofosfato Então cinco linha essa posição aqui então não sei se vocês lembram né então aqui é um linha como aqui eu começa a nomear né Você

deve lembrar 123456789 esse aqui é um linha não comecei a nomear da base né Essa molécula que eu começo na minha base então aqui é o nove e aqui é um linha dois linha três linha quatro linhas cinco linha nesse carbono aqui e que tá pendurado no cinco linha um fosfato por isso que assim clima no fosfato e se pode ser representado assim a isso ele tá falando em preto né deixa que a cama tá Santo Preto então nucleotídeo ele pode ser a desenhar em geral gente falar de Nina mas o nome é correto é

de oxigênio adenilato cinco minutos ou de órtese nesse clima de fato de a para fortalecer essa coisa de que tem um fosfato aqui o de Oxi tem a ver com o fato de que eu não tenho oxigênio na posição 2 linhas música é só h a ideia MP que é o que isso aqui é essa aqui é uma menina certo então você quer adenosina mono é o m fosfato é analogamente você vai fazer para todos os outros isso então você vai ter desoxicolato desoxiguanosina há 5.000 anos os fatos G GG ou de gmp mono fosfato

Oi e aí você vai ter todos o segundo a mesma regra né antes Nina assistir Dina e o e assim então aqui também vai valer para os tanto para os nucleotídeos do DNA que são as vezes Oxi no credits certo quanto para os nucleotídeos de RNA que são os ribonucleotídeos perceba a diferença a diferença está na posição dois linho aqui na posição do Zinha dos nucleotídeos são incorporados ao DNA não tem oxigênio e aqui na posição dos linha tem então isso vai ter uma relevância muito grande em relação à estabilidade da molécula então por exemplo

a moderna e fez uma vacina anti convide baseado em reunião né ela tem problema com isso daqui então você tem que guardar armazenar vacina - 80 por o caso vença a hidroxila E aí bom então série A mesma notação né eu posso falar as mesmas coisas aqui é a única coisa que eu tenho que dizer é que adenosina é sempre monofosfato não é disóxia só tirar o prefixo de boxe e o resto você consegue fazer anotação igual para o a m p g m p o MP 100mp estão todos eles estão aí é Quem são

os nucleotídeos presentes no RNA na real ter substituído por o é bom agora em uma visão que isso daqui uma representação planar a gente sabe que isso não é planar que essas moléculas elas estão no espaço tão indo para uma visão mais espacial eu gostaria de destacar o livro destaca na verdade né O que ocorre na base e isso tá aqui na figura 8.3 são as confirmações da ribose tão e a ribose e ela é um aldeído lembra que isso daqui é delicado da fantasia muito parecido com a frutose Total Exatamente Essa cara aqui e

quando isso se cruza na então eu eu tenho vocês devem ter visto isso né que você tem uma dá aqui que pode atacar esse carbono aqui que tem menos elétrons porque se oxigênio destacando os elétrons dele eu ciclismo esse forma aberta Furiosa porque tem esse nome Fulano Procurei no Google Imagens o que que é qual como que é a estrutura do fulano né produto plano parecido com isso é Oi e aí eu tenho um carboidrato formado esse carboidrato que vai ser usado para se interessar o DNA com relação à sua organização espacial aqui você tem

que ter um pouco de imaginação na que isso aqui sugere que você tá vendo uma imagem 3D eu sei Av Dimensional Mas você tem que imaginar ele deveria ter feito as coisas talvez com tamanho diferente para sugerir profundidade né mas então aqui a base não desculpa a ribose ventosa Aqui está a base como que a pentose pode se comportar é a pentose aqui é o oxigênio né então o ácido nucleico está ligado aqui a pentose se ela tem essas ligações aqui ó é isso daqui embora você tenha uma estrutura cíclica isso é móvel então eu

posso te esse carbono dois linha que é esse aqui Hora acima do plano do anel ora no plano do Anel é analogamente esse outro também o Trenzinho também é móvel então eu posso ter acima do plano onde que ele termine precisarmos ou eu posso ter ele abaixo do plano Então quando for acima ser dois linha você chamar você de Zinha indo quando gabar-se dos linha ex Então seria para dentro para fora né na verdade então ainda porque ele vai estar mais fechado ele vai compactar o DNA e ex que ele vai estar aberto ele não

vai compactar o DNA então e com isso você vê que a ribose e ela vai conferir certa mobilidade local que permite compactar o ácido nucleico de uma forma ou de outra é você tem várias combinações Você pode ter seduz linha ainda que você Terezinha indo C2 linha ex em geral na verdade usando vão se arrepender então você você tem uns três linha ainda você vai ter você dois linha ex no máximo você não vai poder ter ser dois linda porque vai ter interferência externa que você vai o plano mas enfim tem várias combinações que podem

surgir isso é na próxima figura tá dando continuidade a isso eu não vou pular essa parte aqui nós vamos direto para figura 8.7 de já coloca tudo isso organizado na estrutura do ácido nucleico bom aqui é óbvio que eu não vou falar sobre como assunto letra polimerizado isso será ensinado em biologia molecular a disciplina de bioquímica ela deveria tratar das três grandes partes estruturais do livro lehninger A parte Inicial metabolismo que a segunda parte né então a cintura de biomoléculas metabolismo e a parte de DNA recombinante Mas isso foi transferido para outras disciplinas bom então

eu não vou explicar como essas coisas se formam Mas você já pode inferir isso imaginando que por exemplo esse o h que está aqui no trevinho DNA deve atacar algum fosfato para poder fazer essa ligação Bom como que é a estrutura de um ácido nucleico Aqui você vê que na extremidade cinco linha eu sempre vou ter um fosfato e é sempre assim sempre vai ter um fato nas extremidades em clima tá ligado a ribose ligado a base e e em três linhas oga como eu me liguei Eu associei a outra a outra nucleotídeo eu forma

ligação covalente e essa ligação que tem o fosfato tá ligando o nucleotide anterior com posterior é chamado ligação fosfodiéster porque Western se você lembra da cursinho né cedo para ó tracinho ó Isso é um ésteres é um fóssil de esta né Pedro pra ó ó P duplo ó a mesma coisa é só troca o átomo ou heteroátomo aí no caso é fosfato E aí você tem lá ligado no te ligado no G no final se eu não adicionei mais eu não curto eu vou ter uma gaia livre e isso é chamado de extremidade três linhas

então tem nem a sempre assim mas tem me dá de cinco linha uma extremidade três linhas na extremidade cinco nenhum fosfato mono fosfato Nessa idade três linha uma hidroxila ver todas as notícias são ligados por ligações fosfodiéster e universalmente foi uma convenção internacional o DNA ele é sempre representado de cinco linha para três linha então se eu fosse escrever isso horizontalmente só para escrever isso aqui ok a TG certo eu tenho que colocar primeiro a depois o ter depois o gênio nessa ordem eu sei que esse a que aparece primeiro à esquerda é o A5

linha e o Jequié o que aparece mais a direita é o três linha Então essa conversa internacionais é importante que você troca essa orientação eles sintetizam moléculas que você não quer então é muito parecido com aquele problema de trocar a ordem dos aminoácidos nos peptides ó e aqui é a mesma coisa mas para arranhar então eu não vou ter de mim não vou ter uracila na base e no dois linha do da ribose eu terei o a Aí eu disse que isso aqui torna o arrena mas frágil Que bom né E aí o Aciclovir é

um fármaco utilizado no tratamento da herpes simples Aciclovir é análogo de guanidina e como o Aciclovir em pé de replicação viral O que que você acha isso aqui é desloca-se guanidina é o g Sertão nucleotídeos na verdade é o núcleo vídeo né Não precisa quando se fosse por lá mas a sua célula fosforila aí você vai fazer o trinucleotideo de desoxiguanosina a é isso daqui uma ciclovir bom então por que que Aciclovir e interrompe a replicação viral para os lados pensa um pouco antes de ver a resposta Tá bom o que acontece o seguinte comparando-se

as estruturas Observe que desacostumou nesina tenho três nem longa e se permite que eu ligue isso Estenda a cadeia agora se clube não possui a hidroxila na posição três linhas na cadeia por isso ele não permite extensão da cadeia E aí o vírus não consegue replicar seu Genoma Além disso se eu tenho este cara que parece com g e este cara que também parece com g na célula haverá uma competição entre os dois então eu vou certa forma é levar uma inibição competitiva na em cima então percebe que a explicação ela é enzimática e inibição

competitiva e explicação também é estrutural a estrutura do Aciclovir determina isso tem uma terceira coisa que vocês não verão ou talvez em na disciplina que reúne microbiologia parasitologia e imunologia tudo em um o que o Aciclovir ele é concentrado na sala infectada com o vírus por causa de uma enzima chamada timidina quinase e por causa dessas três coisas Aciclovir foi um fármaco assim muito balada e a pessoa que descobriu já estou dela e lá é uma pesquisadora inglesa ganhou o prêmio Nobel o a figura 8-8 bom uma vez que a gente já sabe que o

r na ilha diferença zênia uma pergunta imediata é porque que o RNA seria mais frágil essa figura mostra isso para você Observe isso daqui é um RN acertam cinco linha não fosfato assim como DNA aqui ele mostra a cada interrompida mas se fosse o fim seriam três linhas h a ligação falso de Éster e aqui tá o a então o que acontece se eu tiver uma base essa base pode ser a base da própria água a água é de Sofia eu tô tô no Essa água aqui e ao protonar isso então só que vai diga

água esse elétron do hidrogénio passa para oxigênio aí oxigênio ele vira uma base um nucleófilo Fortíssimo esse ou menos e ele ataca Essa dupla de fosfato aí aqui na guerra entre fosfato e oxigênio oxigênio ganha intensa o fato Ele tava mais positivo Então esse elétron daqui ataca isso daqui então eu vou ligar isso bom e como essa molécula é muito grande ela acaba sendo o grupo abandonador então o sai daqui quando eu ligo isso daqui porque o fosfato ele faça ele não vai fazer mas de 5 ligações aí e aí o que se tem é

um intermediário e esse intermediário assim eu acabei crivando o DNA o Rei Leão ele agora ele tem uma molécula livre aqui e essa outra molécula que termina aqui e depois a água também vai acabar hidrolisam isso daqui enfim e vai não vai ficar isso aqui não vai ficar muito tempo presente né então você vai ter dois linha três linha é uma mistura né de 2 linhas e abre do lado de cá nessa ligação ou três linhas ali do lado de cá monofosfato então isso deixa bem claro que o RNA ele fim de catalisar a própria

Hidrólise na presença de água nele ele ele pode romper sua própria ligação falso de esta por isso que a vacina da moderna é frágil precisa de um freezer - 80 para guardar Ela é excelente Sem dúvida mas é tem essa esse problema eu trabalhei com a reunião em meu doutorado é uma molécula que você tem que isolar e já fazer o que você tem que fazer no dia porque você pode até guardar ela mas a durabilidade da molécula é Baixa ela vai degradando com o tempo em uma semana você não tem mais nada no tubo

Então você no máximo no dia seguinte você tem que ir prosseguir com isso com a renali tem baixa estabilidade é E aí ah ah ah tá bom e os anjos no clix em particular a uracila citosina também ele pode ser aquele que nós chamamos e formas tautoméricas formas tautoméricas surgem por causa de equilíbrio de das estruturas que você tem da própria molécula tão por exemplo a uracila ela tem três estruturas aqui lactâmico lacks in iq ltmcu duplo então eu tenho essa estrutura aqui que é o lactâmicos aqui se chama lá cama né um nitrogênio do

lado de um dupla bom e isso daqui se esse hidrogênio se se oxigene-se protonar eu tenho láctico o ipe se esse outro oxigênio também se protonar eu tenho o aquecimento duplo então perceba que eu altero a estrutura da molécula e isso vai ter consequências que certamente Vocês verão em biologia molecular Então isso é explica várias coisas desses mecanismos que serão estudados a posteriori o usasse nucleicos eles têm uma característica importante agora antes de eu voltar para esse daqui eu preciso voltar para a imagem que mostra eles então perceba que todos eles têm átomos com um

elétron desemparelhado compra de nitrogênio e ligações duplas ligação dupla na base as pazes né que não estou me referindo agora tem ligação dupla elétron desemparelhado e ligação do elétron desemparelhado a ligação dupla são coisas que absorvem radiação bom então eu tenho uma noção da presença da quantidade dessas moléculas e em função da sua capacidade de absorver luz então aqui é uma imagem que mostra isso se você tem várias soluções de varias mononucleotideos a mp MP MP de MP 100mp e quanto que eles absorvem e você vai ver que algum sabe só para sempre me Pedro

sobe muito mais que todos os outros né E alguns absorvem comprimentos de onda que outros não absorvem então se tem a ver também com a transmissão eletrônica não sei se eles aprenderam isso eu vou aprender sem química Mas o que importa aqui é que eu consigo mensurar quantidade de ácido nucleico por conta dessa absorção e isso permite quantificar isso em experimentos de bioquímica que você tá trabalhando com enzima ou você tá querendo fazer alguma reação quantificar importante é por isso que eu consigo fazer essas coisas porque essas bases elas absorvem luz e aí Olha que

interessante aqui o comprimento de onda é o que a gente chama do ultravioleta esse daqui de 230 até mais uma 290c ultra-violeta e é ultra violeta distante como ele se chama não é uma radiação de muita energia então por isso que os as um clique também certa forma são fraudes neles ao absorver nisso daí eles podem alterar a sua estrutura também né por isso que nós temos que ter cuidado com a exposição ao sol os raios ultravioleta e tem um pico aqui em 260 em geral uma medida de presente você quer saber concentração de DNA

e medir absorbância 260 nanômetros o que é tem um pico que é devido às a de Minas e você com para isso as absorbâncias quando souber essa 280 nome será que fica bem embaixo para todos eles em 280 quem apita se você tem uma solução Nessa tu tirou por isso que o DNA da célula óbvio que sempre vem com a contaminação de proteína então e as proteínas absorvem 280 por causa das tirosinas os triptofanos E se eu quiser relação entre a absorvância 260/280 quanto maiores número né 1.7 1.92 mais pura minha preparação de ácido nucleico

quanto menor o número significa que absorveu mais 280 mais impuro então também serve para estudar então você bastante útil essa relação e agora vamos para esta figura esta figura aqui ela mostra como que o DNA ele está organizado espacialmente o DNA que ele é representado na sua orientação cinco linha três linha Então cinco linhas está aqui acima o três linhas está aqui abaixo e você tem uma fita anti Paralela em que cinco linhas tem embaixo e três minha está para cima o que que acontece quando eu tenho essa Associação anti paralela as bases elas ficam

próximas e tal forma que começam a ter interações de Campo chamado interações de hidrogênio nas pontes de hidrogênio e você veio aqui que citosina e guanina fazem Três Pontes adenina-timina fazem duas pontes de hidrogênio e daí você já consegue imaginar várias coisas você já deve perceber que se você tiver grande cá desde a ter elas são menos resistentes Pois vem para cá louco e grandes cadeias de Jessé porque tem mais pontos de interação né Nós vamos dar uma olhada no detalha nessas interações agora então primeiro a interação adenina-timina tão e do carbono 1 linha da

ribose veja que aqui eu estou indicando apenas a base certo então você quer aprender Medina da timina essa que a Purina da adenina que eu ser um linha aqui vai tá Reborn só que eu não estou mostrando isso mas desse carbono até esse carbono eu tenho 11,1 angstroms a grandes o e desse nitrogênio em nitrogênio tenho três aqui deve ser mais ou menos 1.5.2 né que a tem 2.8 desse oxigênio com esse nitrogênio Seria legal se ele tivesse mostrado a distância aqui né mas para você ter uma ideia possa hidrogênio boas são aquelas de abaixo

de 1.7 Anderson né então eu tenho aqui esse nitrogênio aqui da adenina ele tá fazendo o hidrogênio dele faz ponte com esse oxigênio da timina assim como esse hidrogênio da timina faz ponte com esse nitrogênio da adenina e eu tenho essas duas pontes e essas coisas ficam associadas aí é quanto mais nucleos eu tiver ligado mais forte Associação e agora guanina e citosina mesma coisa né então que você tem também uma distância muito parecida né é um pouco menor em relação à distância da linha de mina entre ser um esse é um linha mas eu

tenho 10 e 18 anos Tom aqui eu tenho 2,9 angstrom DN para o três para esse daqui e 13 há mais ou menos três para esse daqui então você vê que todos eles são parecidos né na ordem de 3 anos som de distância entre o nitrogênio eo oxigênio estão envolvidos na ponte na interação de hidrogênio e aí você vê que a guanina citosina é o caso inverso não tem o tema permitindo aqui a Purina aqui o oxigênio faz ponte com esse nitrogênio tá ligado aqui na citosina esses dois gente faz com que esse nitrogênio da

citosina e esse outro hidrogênio faz ponte com esse oxigênio da citocina são... Intensa bem estável on tá bom quando você ver isso isso é posto você então você vai se perguntar como é que você chegou aqui e quem encontrou essa estrutura quem público na verdade né Essa estrutura foi esse dois pesquisadores James Watson e Francis crick ele estava trabalhando Inglaterra outros nos Estados Unidos está fazendo pós-doc dele na Inglaterra Ana Mas eles tinham muita informação da época que foi muito útil para responder Qual é a estrutura do DNA pro tridimensional a primeira coisa que eles

tinham e era isso daqui as 4 regras de chagas no estado gasta um pesquisador que estudava composição de bases de moléculas de DNA estuda na composição de base molécula de DNA de vários organismos assim que já tinham demonstrado que ganharam o material de herança né não sei se vocês leram esse daqui então DNA extraído de uma linhagem violenta dos a bactéria streptococcus pneumoniae quando era injetado na linhagem não violenta tornava as bactérias e lentes estão alguma coisa foi transmitida né Então pessoal já sabia que ganhar que é tem continha informação mas oro enxergar ele chegou

à seguinte conclusão a partir das análises dele um a composição de base DNA em geral varia de espécie para outro óbvio não tenho variação mas ainda assim tem uma grande semelhança então nós hidrófilo nós temos em termos de não o a parte bom vocês vão conhecer que ganhar ele é só a parte crítica genes entre as partes mas em relação a parte que purifica Gene nós somos muito parecidos quase noventa e oito por cento é mas sem dúvida a diferença a diferenças e as semelhanças marcantes mas puxar gás então faria isso não tem como negar

amostras de DNA isolasse diferentes tecidos da mesma espécie tem a mesma composição de base Isso é muito bom porque significa que se todas as células se elas são ruins ao seu basta do coração se ela do servo tem a mesma estrutura tem um mesmo assim pública mesma composição isso sugere que esta célula que contém de esse ácido nucleico contém informação para gerar todos esses tipos de célula Então mas se ele gerou todos esse tipo de sala provavelmente como nós nascemos a partir de uma célula é ele quem guarda as informações da herança é o mais

uma coisa apontando E para isso três a composição de base DNA em uma dada espécie não muda com a idade do organismo você está nutricional ou a mudança de ambiente isso é bom significa que é como não muda é aquilo que a constante aquilo que é herdado E aí sim aquilo que é mais importante que ajudou muito altos e clique em todos os DNA celulares independentemente da espécie o número de resíduos da adenosina é igual ao número de registro da timidina Isto é a quantidade de A é igual à quantidade de ti e o número

de resíduos Igor Usina é igual número de exemplos ide Na quantidade de G é igual a quantidade de cê dessas relações correlações conclui-se que a soma dos resíduos de Purina é igual a soma dos resíduos deprimindo seja a + z = ter mais Sertão veja como isso é dramático se você é quantidade de ar é igual a deter Por que que e se a quantidade de G = DC por quê que é igual e Por que que as purinas são igual a quantidade de purinas é igual a quantidade de pirimidinas e sugeriu muitas coisas era

muito difícil e entender isso mas geravam várias hipóteses e mas não tinha sido suficiente para resolver o mistério até aqui rosalém Franklin que trabalhava com o juiz Wheels na Inglaterra também Rosaline foi a cientista fantástica que conseguia obter isso e isso é o padrão de difração de raio-x de fibras de DNA ninguém tinha conseguido isso e certamente Rosarinho ruins se tivessem tido a oportunidade né Oi Rosane veio a falecer depois teriam resolvido estrutura do DNA enfim há várias explicações para como esta o Daniel foi parar na mão do Watson e crick mas basicamente o que

se pode dizer aqui que Rosalie obteve o padrão daí bastava você ter a interpretação correta utilizando as informações importantes da época por exemplo as informações que o chargaff obter bom mas como é que se obtém isso daqui eu já expliquei de fração por raio-x proteínas então é a mesma coisa que acontece com DNA eu vou mostrar um vídeo didático que mostra um pouco como que surge esse padrão de inflação mentalize ele veja que eu tenho aqui todas esses essas coisas formando um X aqui né E se x é importante você vai ver e essa extremidade

assim isso é importante para você então vou mostrar um vídeo e esse é um vídeo do Royal institution que eu acho que vale a pena para você também assistir os outros vídeos ruim institution que são muito úteis né divulgação Científica vamos ver o mesmo sexo anal então ele disse que ele vai usar a de fração com laser para obter o padrão de x que nós acabamos de ver da difração do DNA é óbvio né aqui quem encontrou o pato é o padrão de difração foi Rosário em Franca em e se você estudar aí na internet

você vai ver que o outro não teve oportunidade de ter acesso esses dados E aí E aí E aí E aí E aí E como estava muito perto ele deslocou e esse é o padrão de difração de um fio que ele fil dizem fio galvanizado então laser passa pelo fio e faz esse padrão de difração da Luz a novinha página 51 se você tem causa do filme isso é importante então como o fio ele é mais curto que o laser que o raio por isso que dá esse esse padrão de fração o raio laser ele

foi cortado E aí a luz ela acaba se distribuindo nessa forma é uma nova forma é é que tentar explicar de infração desta forma enfim é uma simplificação didática não entendo porque ele se confunde um pouco E aí E aí E aí E aí E aí E aí e o que que ele tá fazendo aqui ele já sabe certo ele ele tá tentando reconstruir o padrão tá querendo encontrar o padrão de tração DNA Então como que eu reconstruo tão com laser Ele já sabe né então que o padrão de fração DNA é de uma molécula

em escada em L se então o que ele faz é cada patamar da hélice é um fio desse então cada fio desse tá num patamar e esses eles estão torcidos formando uma escada em espiral helicoidal E aí você vê o padrão de forma e percebe que ele tem muito mais caro do X1 E aí em salvar com imagem em mim E aí a foto sozinha Instagram Nossa grande número de roupas padrões uma coisa E aí E aí Oi gente vai famosas brasileiras com maior amor na paz então isso é importante uma vez que você tem

o padrão na o que foi feito no passado é isso você tinha um padrão já você tinha que usando matemática reconstruir a estrutura então ele já sabia tá estrutura ele só fez um alguma coisa que se parecia desse tratou o laser era assim eles não eles tem que imaginar então por isso que foi importante usar as regras de chargaff e agora é uma ideia genial que ele teve então ele pega um bulbo de lâmpada pequena para fazer o de fração E aí e o filamento de lâmpada ele é um helicoidal como é que parecido com

alfa-hélices né então da forma como ele fez colocando cada fio num patamar Não dava essa impressão dele cortar eu tinha os patamares mas eu não tinha União disso aí ele pegou algo que é pequeno menor com laser e que tem o padrão de helicoidal E é isso que ele quer hidratar agora E aí E aí E aí E aí eu faço três cada um E aí E aí a menina então percebe que quando você altera é a distância da marca nos estende a mola você mexe com o padrão E isso tem a ver com simples

de DNA que existe né você mexendo com empacotamento de ganhar você muda o padrão por isso que eu consigo determinar outros tipos de DNA pelo padrão de difração é é bom que já tá Evidente né ele obteve o padrão de fração de Rosane em o cabelo não E aí E aí E aí E aí E aí E aí E aí E aí E aí E aí E aí é bom Aqui você vê que esse padrão de difração E aí dente com esse compare Então esse é o feito com o filamento da lâmpada que foi estendido

da forma adequada e esse é o que foi obtido por Rosalie Franklin a Tá bom Agora que você já entende bastante do DNA do seu padrão de difração de sua estrutura e com certeza você consegue entender o que está acontecendo aqui nesta imagem Então essa imagem uma estrutura de DNA e nesta imagem você consegue ver várias coisas que são descritas no livro então por exemplo essa distância curta aqui é chamada de suco menor a distância grande que essa daqui até aqui é chamada de suco maior o que está em vermelho Está caro por fora na

molécula são os fosfatos que estão pro lado de fora eles são hidrofílicos e você vê que eu tenho planos aqui planos muito bem definidos eles vão inclinando mas enfim sempre são planos são os planos das bases lembra que as bases elas tem várias ligações duplas Então por causa disso elas são estruturas planares e aí nesses planos ocorrem as interações de hidrogênio entre as bases estão se você fosse pequeno o suficiente você conseguiria subir isso daqui como se fosse uma escadinha Então essa é a estrutura do DNA então todas as coisas que ele mostrou estão o

padrão de fração então ele é a difração que se deve a esse é o movimento helicoidal de ascensão e mais os planos formados pelas bases EA distância entre os planos determinam o tipo de padrão a questão 1 e olhando para aquilo que você leu no livro né O que são interações empilhamento Quais as forças envolvidas por quê que isso ocorre É bom assim ter essa sempre lamento interações hidrofóbicas em que duas ou mais bases são posicionados com os planos seus anéis em paralelo Então o que estabilize né não é só as pontes de hidrogênio as

bases estão empilhadas umas nas outras e isso permite que elas têm interações as bases são fortemente hidrofóbicas Então isso acaba a interação hidrofóbica causada né Por se distanciar da água acaba permitindo nessas interações de uma de vossas a compactar mais o DNA for desenvolvidos né então são essas daí de Paulo de Paula e forças de Van Der waals E por que que as ocorre porque ajuda a minimizar o contato das bases com água estabilizar a estrutura tridimensional dos ácidos nucleicos isso é muito importante é tem soluções tecnológicas que dependem desse empilhamento e Talvez você encontre

sim sua carreira como a biotecnologia e E aí e continuando é tão mais uma vez né Parabéns Rosane frankilim que achou tudo isso também ó tem que resolver na estrutura enfim Rosalie morreu antes de ganhar o Nobel quem ganhou o Nobel foi o wickings Watson clique em e essa figura 8.13 é a figura que mostra o DNA que o outro se clique encontro bom então aqui tem esses nomes das coisas né então você tem o suco menor que essa distância o suco maior que essa distância daqui para cá do tem o pareamento das bases você

tem esse passo aqui que é de 3,4 anos Tom esse passo para eu conseguir dar uma volta completa e chegar até aqui em uma das fitas é 36 anos som e o diâmetro da molécula é 20 então isso aqui é nesse modelo Esse é o modelo de varetas que o modelo que o o sempre que usou e esse é o modelo de bolas então se você assistir Big bem tio e você já deve ter visto isso que eles têm um modelo desse na sauna então que tá em azul aqui é que acho que as coisas

não foram bem escolhidas mas enfim é que tá em azul são aos fosfatos o que tá em amarelo são as bases estão ele não distinguiu os átomos aqui né então chamou base do d amarelo e aí sim e você vê o suco maior e o suco menor dessa importantes do suco sair são alvos de enzimas e e a e daqui vamos para a figura oito. 15 quando o ódio cíclico poço propuseram esse modelo Eles foram Além disso no artigo não tivesse publicado na net eles conseguiram com essa estrutura explicar como ocorre a replicação do DNA

então eles disseram que a replicação é semiconservativa Deve ser semiconservativo porque eu consigo tendo uma fita como molde sintetizar a outra que é o que acontece aqui então tem uma fita original essa fita original provavelmente deve separar e ela é usada como molde para sintetizar as fitas novas e aí eu teria duas cadeias filhas de DNA que são idênticas a cadeia que as originam Então é isso foi de fato a revolução na década de 50 foi uma grande revolução descobri isso e até hoje a gente não conseguiu aprender a sentiment tudo que gostaríamos sobre o

DNA somos muito longe de entendê-lo completamente a é mais uma coisa importante o DNA então ele como eu disse né quando ele ajustava molinha lá dependendo do seu empacotamento eu vou ter umas padrão de fração diferente Além de eu ter aquela alteração conformacional na base eu também tenho esse tipo de alteração conformacional que se dá pelo fato de todos esses ângulos aqui rodar em então aqui eu tenho uma ribose sabe o que tá ligado uma base aqui vai ter uma trombose trabalhos Mas entre essas duas ligações fosfodiéster entre uma base e a outra todas essas

ligações gilliam bom então eu consigo produzir várias conformações vários tipos de compactação Ou descompactação posso tirar esse de forma a estender o máximo no eu posso torcer isso de forma seu mais compacto possível além disso a última coisa que que também gira que não está representado aqui é que a base que tá ligado no C1 linha ela também gira então eu tenho duas conformações por exemplo para adenosina né eu vou ter a conformação sim em que imagina como se fosse uma bandeirinha né adenosina nota apontando para ribose e aqui é conformação antes adenosina tá apontando

para fora da ribose então nós estão em oposição bom então esse também vai alterar o tipo de empacotamento de DNA E isso também ocorre nas bases pirimidínicas também eu posso ter sim e eu posso ter Ant é como eu disse o padrão de difração revela o tipo de estrutura de DNA que tem implica encontrou uma forma de DNA que a chamada dna-b mas existem outros Existe uma forma chamada forma a uma outra chamada forma Z a forma ar mais compacta é essa daqui pode vir aqui aqui a gente tem o mesmo a quantidade de nucleotídeos

nessa fita nessa mas aqui na formar esses objetivos são compactos Olha como a Organização das bases na forma e essa é a forma B vejo Organização das bases na forma b e essa é a forma Z que é a forma mais estendida possível e essa organização das bases na forma se agora alguns dados sobre essas três formas tão a forma a a orientação da hélice a hélice direita hélice direito é o seguinte você seu polegar aponta na direção cinco linha três linhas e os seus dedos né o dedo indicador o mínimo como polegar apontando na

direção 5 entre as linhas se você rotacionar na segurando no eixo do polegar rotacionar os dedos do mínimo indicador Você sabe se a hélice gira para a direita e para a esquerda ela famosa regra da mão direita e talvez você tenha visto no cursinho então não a Alícia direita no direito e no C ou Z né que tá você colocar você aqui é esquerda Oi e aí você tem os diâmetros na cada um desses aqui vou ter um diâmetro cada vez menor no passo de base então quantas bases eu tenho que passar para dar uma

volta completa 11 na 10 e meio na be12 nascer curioso isso nós estamos estendida tem que dar mais volto a andar mais né temos de aço em Bases incremento na hélice então: seis anos são três. 43.7 isso faz sentido porque você quer falar mais estendida se as Medial essa - extendida a torção da eles 20 graus Celsius desculpas 20° 6° 7° com formação do anel da ribose então cê vê que aqui esse S3 linha indo faz sentido porque é o mais compacta possível e você trenzinho aquele que vai compactar mais se eu não compactar vocês

três linha próxima opção é compactar você dois linha saindo e aqui cê dorzinha ainda você três minha indo esses dois aqui eles são os mais compactos mas aí eu tenho conformação antes nas purinas e pirimidinas que permitisse abertos Pode ser que as bases são apontando para fora pode ver aqui e esses antes Ina no caso cinco poder fazer pagamento com alguns e isso aqui é exclusivamente antes se você tem esses 3 tipos de moléculas de DNA A E aí E aí é bom existem vários pareamentos possíveis nesses pagamento igual cycle que tem outro pagamento que

nós chamamos de pareamento Rust o pagamento de hosting ele é diferente eu já tenho um t pareado com marca isso daqui e aí um outro te vem para cá e parei com isso isso vai gerar um que a gente chama de DNA triplex analogamente se eu tiver já almocei interagindo com g por três pontos de hidrogênio O que é esse daqui eu posso ter um outro se no caso ele tá aí anisado né variando Por aqui e formando um tríplex então eu conseguiria fazer um tríplex DNA há muito tempo atrás acreditava-se que você conseguiria modular

a expressão gênica usando esses DNA triplex mas as vacinas de DNA ainda estão em curso né uma outra coisa interessante que é possível formar com o DNA é o chamado G tetraplex bom então é isso é um tetraplex de guanase na Então as bananas elas estão pagando umas com as outras em Duas Pontes de hidrogênio e isso ocorre então Existem algumas regiões no DNA no que eu tenho muito G E aí as fitas elas tendem a se organizar dessa forma formando tetraplex isso tem a ver com regulação gênica porque se você tem o tetraplex desse

formado e eu consigo estabilizar essa estrutura eu não deixo o gêmeo daquele lugar será ativado então G tetraplex eles têm sido utilizados para procurar farmix para terapia Então são regiões ricas em G certo ao tenho na verdade isso daqui é um gemmas é uma fita na fita com mais nucleotídeos mas os dias eles estão de tal forma que eles formam esse daqui então aquilo que você vê que eu tenho e mais fitas para formar o tetraplex E com isso eu consigo modular a expressão se eu consegui estabilizar essa molécula em geral Esse é um assunto

pessoal fala mais em pós graduação mas talvez vale a pena você perguntar quando você tiver biologia molecular como é que se controle a expressão gênica estabilizando 1g tetraplex E essas são as estruturas possíveis de formação do GT theraplex eu posso ter o jeito dataflex paralelo Então tá todo mundo de cinco linhas três linha apontando para cima e os eles vão pagar aqui perceba que a que são fixas diferentes e aquele só destaca urgente então aparece ocorre 1g aqui ocorre 1g aqui a corrigir aqui mas eles estão de tal forma dispostas nas outras três fitas que

eles estarão bom então são 4x você pode imaginar que isso daqui é pode ser um cromossomo que se dobrou E aí eu tenho interação entre seus suas partes então dá isso daqui dá esse tipo de estrutura é um caso que seria mais de uma molécula E aí eu tenho também interação antiparalelo mesma coisa vou ter um jeito aparece aqui outra que eu tô aqui na outra fita antiparalelo de tal forma que ele se pareiam formando esses panos aqui então é possível estabilizar essas moléculas aqui impedir a expressão gênica se você tem vários artigos sobre isso

então recomendo que você procure no pubmed aí hein aqui em português né eles são de quadruplex mas se você for procurar na base da Asus né Me desculpa se você procura aquele sonho de tetraplex você for procurar na base de dados pubmed e eles colocam g-quadruplex é isso daqui a coisa 8:21 fala que coisa de biologia molecular eu não vou abordar aqui então chegamos ao RNA fita simples Então essa é o desenho da fita de RNA você tem que todas as bases aí estão expostas não dá porque se a base está exposta em ali hidrofóbica

ela vai interagir com água vai ter problema então arranhar ele naturalmente vai atender adotar uma forma para poder escapar disso que você não vai encontrar o RN assim dessa forma Claro em alguns momentos ele estará assim por exemplo no interior do ribossomo mas na maioria das vezes ele não está assim ele adota uma forma estrutural a reforma estrutural é essa ele interage com ele mesmo então algumas bases DNA vão parear aparelho com os e com GC com g ou com a Claro Às vezes eu não tenho pagamento perfeito mas eu tenho mínimo pagamento que permite

formar uma estrutura que faz com que as bases escapem da água né então aqui o que a gente destaca são esses elementos aqui ó quando você não tem pagamento é a protuberância alças internas ou os grampos agora veja que interessante se eu consigo como a sequência de RNA adotar uma estrutura espacial e as estruturas espaciais podem formar acabou-se para qataris então é óbvio que você espera que a Renata tem a capacidade catalítica eu errei na de fato é que existem várias ribozimas Então o que a gente tem um detalhe o tempo de saber como criar

na eu tenho uma hélice o assunto clique acontecendo aqui forma esse grampo por interações né então a gente representa assim mas no tridimensional ele tá desta forma G1 e agora é isso daqui é uma outra representação e se você me vários artigos você vai ver estruturas de reais indicados essa forma então você vem os pagamentos grandes que formam as alças internas principalmente quem tá ajudando o ribossomo o que Bolsa Família todo assim tem todas essas estruturas extremamente complexas recentemente o nosso pesquisa tem estudado o as umidade maior do que possam homens com grau e eu

tive que lidar com isso daqui então mesmo em softwares de análise estrutural essa estrutura são bastante pesadas para o computador sempre tem um computador bom para lidar com isso daqui né E aí você vê que ele mostra que há interações inclusiva a distância não é isso daqui tá parando com isso daqui Enfim então essa tridimensional a gente tenta representar do melhor jeito que pode no plano bom E como eu disse a mulher que ele tem nada pode se organizar e tal forma que ela pode adotar várias outras estruturas úteis Por exemplo essa estrutura aqui nessa

estrutura daqui eu estrutura de um te RNA e essa outra estrutura estrutura da ribozima Cabeça de Martelo é uma enzima e a estrutura se é um intro é o interesse em aprender engrossar molecular é uma região do RN aqui é esse sal das vezes então tem papel estrutural mas isso mostra para vocês quais são os tipos de estrutura tridimensional com a reunião Pode adotar são vários então é o rma ele ele é um catalisador mas tem aquelas desvantagens né você teria problema é devido ao fato de que dependendo do PH você leva a Hidrólise do

RN a né então tem que ter muito cuidado se você quiser e se estender um pouco nisso né então em geral catalisador é proteína Ninguém vai querer trabalhar com arranhar é certo quando você tá falando de pesquisar até a gente resolver esse problema daqui daquele 2 linhas né se você conseguir resolver pelo menos dois linha lá eu não teria tanto problema aumentar estabilidade da molécula os dois lindo a química dos ácidos nucleicos bom com relação a químicos ácidos nucleicos a primeira coisa que a gente fala é de pagamento desnaturação só você tem um ácido nucleico

dupla fita se você aquece ele ou se você joga por exemplo ureia moléculas Natura vocês e para as fitas Oi e eu tenho essas fitas separadas aqui quando você trabalha com isso em geral nenhum pessoal usa aquecimento então se você aquece o DNA o aceita se separam e ficam assim se você pegou o tubo tirou do banho termostatizado aquecido e deixa o tudo encostadinho na bancada naturalmente as fitas elas renaturam essas bases se encontram e eu tenho formação da dupla fita mas às vezes você não quer isso as vezes está trabalhando com DNA carregador que

vocês vão estudar em biologia molecular é um ganhar que permite que você insira moléculas de DNA em células vez tem a carregador você não quer que ele re Natura então o que você faz você diz Natura isso com calor e quando as moléculas estiverem Assim você faz um choque térmico você transfere do banho lá 94 graus celsius e insere dentro de um balde com água e gelo Então o que acontece aqui como você reduza a temperatura muito rápido não dá tempo dessas moléculas explorarem o espaço tridimensional se encontrarem Então nossa um ano e esse DNA

fica desnaturado por uma semana aí até ele espontaneamente ser natural Então isso é uma coisa que você pode fazer e talvez faço aí quando você lida com DNA no laboratório i a i o DNA uma vez que ele desnatura e o pessoal passou estudar um pouco esses efeitos da desnaturação bom então aqui você tem o na figura 8 27 medidas de medidas da desnaturação do DNA Então como que ele fez aqui vou de tacas chamar ela para você ver aqui eu tenho duas curvas de desnaturação então eu meço a desnaturação ao longo de uma rampa

de temperatura então você vê que essa fita de DNA ela tava na ativa até que de repente a desnaturação dela aumentou demais quando passou por essa temperatura e aí esse TM m é de mel TIM fica meio ruim isso mas ensina mel tem seria difusão né mas a fusão Na verdade ele quer dizer de separação das fitas é a temperatura em que até cinquenta por cento de separação das fitas E aí aqui eu tenho 100 porcento separação é uma outra fita de DNA eu precisei dar mais energia e não ele tem um teme maior então

com isso daqui eu posso comprar as duas filhas né Eu sei só olhando essa curva aí que provavelmente a fita de DNA da curva vermelha Ela deve ter mais de ser porque eu precisei dar mais energia então deve ter mais Pontes de hidrogênio aí né em conta Azul deve ter menos pontos hidrogênio aí eu não sei se você vai conseguir imaginar como que você me diria essa desnaturação você imagina aí aí você tem que olhar aquela é aquele slides aquele aquela imagem da curva de absorção né Se a base está dentro do DNA ela tá

escondida Então ela absorve pouca luz mas à medida que eu desnatura o DNA absorção de luz das bases aumento Então esse aqui permite-me de Eu meço a absorção de luz E aí consigo acompanhar se ganhar até desnatado tá assim que é feito essa medida aqui e aí eu chargaff muitos outros fizeram esse tipo de coisa que que é bem interessante né aqui eu tenho a quantidade de G ser de nucleotídeos em várias fitas então eu tenho fitas aqui que tenham zero GC e 20 40 até oitenta por cento de GC e aqui eu também tá

na temperatura e aí você vem uma coisa que é inspirado você sabe disso porque você olhou essa curva aqui quanto maior o número a quantidade o percentual de GC da molécula maior a temperatura necessária para desnaturar agora pense existem regiões DNA que são enzimas mas para sequencial daí ela tem que ter DNA linearizado então isso a gente chama de regiões de alta complexidade ser muito difícil de se conhecer a têm nomes que são riquíssimos em GC principalmente dos organismos que vivem nos o garçom bactérias termófilas Então você espera que tem esse para poder aguentar lá

o extremo de temperatura mas isso é uma coisa boa por que significa que é uma propriedade que você pode controlar em moléculas que Você estude e E aí é bom a e eu queria mostrar agora essa imagem aqui e essa é uma imagem de uma molécula de DNA visualizados por microscopia eletrônica então aqui eu tenho a dupla fita então É de fato é uma corda né você vê a um cordão aqui e você vê algumas bolhas aqui ó bem no meio do DNA bom então você tem uma bolha que uma bolha que uma bolha que

uma enorme aqui e o que que você espero que tenha nessas bolhas aí que onde teve a desnaturação ah eu imagino que você deve ter dito que o que você espera é que o Daniele tenha mais conteúdo de adenina e timina sakineh então por isso que forma essas bolhas seja você temperatura aí mas a natureza essas bolhas também são usadas nas enzimas que reconhecem para abrir o DNA na hora da explicação elas procuram essas regiões fica assim adenina para poder separar as fitas para poder separar as fitas e essa separação permite a replicação E aí

tá bom nós vamos fazer uma pergunta aqui não sei se vocês vão conseguir responder sobre o tetraplex a porfirina 5 10 15 20 tetra n-metil quatro pide Lu cm typ4 essa aqui ó essa molécula é um composto capaz interagir e estabilizar o g-quadruplex nos telômeros dos cromossomos estão aí você já sabe que o telômero é extremidade do cromossomo forma no G4 flex ou G tetraplex comportando-se como inibidor da telomerase telomerase a uma enzima que estende o comprimento dos telômeros na extremidade promoção ati lameras é uma enzima fortemente ativa em Células tumorais E E no fim

das contas é por isso que o câncer ele é uma célula e mortal porque Ele estende os telômeros quanto ele quiser E aí ele pegou uma coisa simples para você então ele combina e os quadruplex com desnaturação como seriam as curvas de porcentagem de quadruplex enovelados versus temperatura não vence na presença de TNT yt4 tem que desenhar e as coisas seriam assim então aqui eu tenho o veja que eu tô medindo aqui o enovelamento do quadruplex né simplesmente me de absorbância calcular um sobre absorbance então aqui tá o meu quadruplex montado é que tá o

meu quadruplex montaro então em preto é a curva na ausência do meu tmb yp4 como você vê que a medida que aumenta a temperatura ele vai ter um ponto de fusão em mais ou menos 44 45 graus Celsius E se eu disse ontem Pedro ele vai se ligar a quinta Será que ele está associado aos vezes é isso que você que essas moléculas fazem então eu travo isso então tem mais interações de hidrogênio logo quando eu desnaturar e isso vou ter que ter mais energia para poder separar isso Qual é a boa aí é que

se eu faço isso e eu agora dou uma dificuldade para célula tumoral estender seu telômeros Só não entendo o seu telômero ela morre Então seria uma terapia potencial para o câncer é óbvio que você tem g-quadruplex em várias regiões do Genoma então isso não é tão simples assim mas são essas moléculas que possibilitariam você dentro de uma janela de tratamento aceitava né Por exemplo a fornecer para o individo essa molécula que impede que as células se replique e como ela não se replica Aí sim você entra com quimioterápico que vai reduzir a população dessa molécula

Ah mas é um uma pergunta então qual seria a explicação para o curso desnaturação do DNA dupla fita baixo Então você tem um desenho aqui né e em verde é uma região rica em até em laranja região que tem a mesma quantidade de a tgc em roxo azul claro tem uma região rica em GC e aqui está o DNA nativo à medida que o aquece só que uma rampa de temperatura você vai ver que formam as bolhas e até que o DNA ele é todo separado em fitas por quê que é assim ó é bom

que acontece o seguinte adenina faz parte do gênio com timina e citosina faz 35 anime então a te faz duas GC faz três Então desnaturação se inicia até porque tem menos pontos são pode ver até Verde as primeiras bolhas vamos formar aqui onde tem menos e pontes de hidrogênio em seguida a região com teor intermediário DJ's E vai formar bolha dança que tem intermediário Então vai abrir aqui e abra de fato a boleta uma hora que e essa bolha aqui aumentou com esse daqui e por último a região mais rica em G C se abre

então isso aqui é a ordem e por outro lado se você quer fazer o DNA se acha como se fosse um zíper você sabe que você tem que ter bastante GC para fazer esse caminho aqui né então é isso é interessante porque eu eu interajo as fitas pelas extremidades um pouquinho no meio em que se deve facilitar muito o renovamento disso então às vezes você tem uma máquina que sintetiza a fita simples e você fez isso de propósito para ter a fita dupla renaturada rápido e às vezes não às vezes você tem um Genoma assim

você feliz naturais e aí você passa por esse processo mas isso mostra bem esse tipo de coisa e finalmente Oi eu gostaria de falar de síntese de DNA com eu não vou falar do sequenciamento não vou falar de notificações e se vocês vão ter tudo envie o maior Então não é necessário repetir essas coisas aqui você pode se dar por conta então esse sequenciamento aqui já é uma técnica superado Mas isso foi quando nós temos pouco tecnologia Mas enfim vimos essa tecnologia Mas a temos o sequenciamento de Nova Geração isso aqui na minha época quando

fazer o doutorado essa era a técnica mais empregada que era um método de sanger O que exatamente este aqui é só que utilizando sondas fluorescentes que são essas coisas coloridas aqui que ano detectados por um detector quando excitados por um leis ele formavam essas curvas Mogi consequência aumento de Nova Geração é muito melhor aqui isso mais rápido e aí aqui ele mostra como você sintetiza DNA Então eu estou na figura o 8.35 Tão o nome desse método é a mesa do fosse ali medita Então como que é isso né como que eu começo esse método

aqui eu vou fixar o denial ficção a base de DNA em uma bola em uma micro esfera partícula de silício Então tá aqui o meu primeiro primeira nucleosídeo né então aqui tá base na ribose aqui oxigênio eu liguei no rsr Tá ligado não é situação radical que permite ligar no silêncio tá fixo e aí o que que eu tenho aqui esse dmt nossa anos de grupo protetor o que tem um grupo protetor é um grupo que não vai deixar essa reagir com nada até o momento que eu queira somente no momento que eu quiser eu

vou poder trabalhar com isso então eu parto disso Oi e a copo no silício E aí eu tenho esse isolado Aí sim e o removo esse grupo protetor promete condição de base o assunto aí eu fico assim e agora que que acontece bom esse cara que você sabe muito bem que ele é né dependendo do PH ele é um nucleófilo aí eu preciso agora ter a outra outro nucleotide para o qual ele vai atacar e fazer ligação covalente aqui está o outro não ter tido também tem uma proteção aqui porque eu não quero que se

o h o trabalho como uma criança aqui está a base e eu adicionei se fosse era medita que tem esse grupo protetor se ano e tio e esse grupo ativador de isopropilo Amino bom então porque é que isso é um grupo ativador Porque como esse tá positivo Ele vai tentar arrancar mais elétrons e se P então q vai ficar bem positivo mas aí esse oga não PH correto ele ataca aqui são nucleófilo vai atacar aqui nesse fósforo cátion e quando ele ataca esse o entra aqui esse é o meu grupo abandonador você dá que ele

sai e eu tenho ligação deste ou H nesse fosfato eu fiquei com esse ano e tio aqui mas o senhor meu tio também é fácil de remover Então você oxida isso para ter um triester na Então você você tinha isso daqui na forma que não era essa e Mas você oxida para ter na forma de um de um esta então que você for uma ligação falsa modesta bom e depois você elimina oceano tio com medrosa na Então é só você tratar com base a base ataca aqui eu abri esse daqui controlada né E aí eu

posso repetir esse ciclo quantas vezes eu quiser então esse cara aqui ele vai continuar ligado na sirica veja bem né ele ele colocou a certinha mandando ele para cá né não é isso não ele volta para cá para esse aqui para reagir com o próximo que ele não vai se acoplar hoje de novo né eu não vou é e na verdade sim né porque tem ele tá com grupo protegido né não volta para cá para GNT reagir e repete isso várias vezes até você obter a fita de DNA então assim que é feito mas eu

queria mostrar assim se desenhar na forma de um vídeo para vocês Ah então você quer uma empresa chamada de horta e eles fazem sim se DNA Vamos ver que eles ensinam para nós aqui E aí E aí Oi bom dia WhatsApp Fernandes longe demais a palavra Oi gostosa o que faço para a cachaça jogos jogos a mensagem uma E aí E aí bom então quê que acontece você solicita o seu DNA aqui do Brasil e cai na mão Desse pessoal que vai analisar sua sequência era passível de se como eu disse né Você conhece dizer

que assim já se vão dar trabalho é bom isso também é importante eu não posso sintetizar o que que o cara quer né então se o cara quer se tendes alguma toxina alguma coisa que é perigoso que tem um potencial precisado como bioterrorismo eles vão verificar se também e perguntar se você tem alguma autorização governamental enfim né mas em geral isso eles vão rejeitar isso né o cachorro previsões foliões olha vejo que ele disse overlapping ó logo núcleo tarde eu não vou sintetizar o DNA no trenzão só eu vou sintetizar o DNA da seguinte maneira

eu vou ter várias fitas que tem regiões curtas que sobrepõe umas às outras da sintetiza coisas pequenas no aparelho essas regiões se sobrepõe E aí sim obtém a fita Grande a senhora que jogar jogos 3D e o jogo E aí o vídeo fala o som bom então a máquina colocou esses filtros e eu consigo colocar esse vidro onde já tá ligado uma pré-sequência Oi amiga Oi e aí usando o falso nome data eu vou sintetizando alongando a cadeia E aí E aí o vídeo pornô brasileiro o leite em 4 minutos então aí você vê em

cada Cada poço de se fosse interessado uma região do DNA completo que você tem interesse em São Paulo bom então agora tudo isso foi misturado em um único poço a criança E aí o celular Forró Romântico cartão E aí G1 Bom dia e aqui eu acontece overlap Então você tem que assim você fez assim eu sintetizo algo que vai ter um pedaço de sequência que parei aqui o mesmo pagamento logo sem clique que tratou-se nessa aula então eu sentei dizer coisas pequenas mas elas pareciam e forma um todo depois uma enzima no caso a taq

DNA polimerase e ela sintetiza fita inteira a partir desses Moldes e e ao final ele ele colocou isso que ele chama de experiência são terminais coesivos para permitir clonagem em um vetor um vetor é um plasmídeo o Clo no plasmídeo bom e depois esse plasmídeo ele é transferido para uma bactéria E aí bom então depois disso você se conhecia essas moléculas de DNA para ver se você tem a sequência solicitada a E aí é nós Bom dia Oi cadê você irmão Casou foi E aí E aí Tá bom então isso mostra como que é feito

assim se no laboratório E concluo assim a aula de nucleotídeos e ácidos nucleicos e