Aula Prática: Preparo de amostras para Microscopia Eletrônica de Varredura – MEV

é você que não se inscreveu no canal aproveita se inscrever vou mostrar aqui laboratório alguns algumas amostras que eu separei para a gente preparar né tem aquele os materiais o computador que eu estou usando e outros materiais ali à frente e ali à frente os aparelhos de preparo Tá bom então eu vou fixar a câmera aqui para a gente poder começar aqui a prática de fã eu vou trabalhar aqui em minhas mãos chegando vou trabalhar um pouco mais sobre a questão do os tipos de amostras aqui a e a coleta tá então temos aqui E

aí o prazer informações de folha né a gente pode conectar usando o furadores para a gente pode usar tesourinha né para coletar Mas é interessante esses fundadores porque eles permitem uma padronização na no tamanho da amostra coletada então aqui a gente tem por exemplo no meio né aqui da do Limpo Então olha só tem almoça aqui hoje conectados [Música] eu vou colocar aqui não microtubo de 2 ml é um detalhe muito importante é o seguinte se você pegar se você pegar no meio aqui da nossa e apertar vai lá no microscópio de varredura você vai

ver uma enorme É um enorme buraco tá então você já tá causando deformação só moça então o ideal é você pegar aqui bem na no cantinho tava o lugar onde você não vai observar Aonde você pega aqui no cantinho tá ou então recolhe amostras ó com uma espátula né aqui não deu muito certo que isso aqui não é isso para todas nós aí você né Pega com maior cuidado possível colocar a quinta o que a gente tem um fixador para nós que tá Ele vocês podem ver perigoso né extrema categoria extremamente perigoso E é claro

né disco de vida é claro que aqui não tem qual é nós que tá bom gente isso aqui é um frasco para aula prática tá é um carnovsky sei claro que às vezes você tem que coletar não sei no campo então você pega que que você vai fazer você pega o seu trocar nós que vai lá para Capela de exaustão de gases você não respirar esse fixador Aí você coloca dentro dos tubos já identifica seus tubos antes de ir para o campo e aí lá no campo você vai colocar dentro desses tubos vai abrir e

fechar rapidinho não vai ficar respirando isso tá bom então e peças a gente vai usar pipetas novos tá e aqui tem umas petas posso ter o pênis ou então você pode usar também é tipo Eles automáticas com a ponteiras ponteiras novas tá porque senão você pode contaminar o seu fixador e ele começou a oxidante tá então vou pegar aqui eu fico trocar nós tá E aí não tá dando para acompanhar aí gente bom então você coloca geralmente um volume para cobrir as amostras ou mesmo para o e tem que sobrar né Não pode ser exatamente

ou volume das amor se o ideal seria 10 o volume 10 vezes maior do que as nossas como as folhas são bastante finas é isso é fácil de conseguir Então esse volume tá mais do que suficiente para essas a moça tão vendo que elas estão é boiando aqui né então quer dizer que o seria interessante usar o sistema de vácuo né a gente pode utilizar etiquetas how to a lusoponte fita crepe né o que Acabou de acabar posso usar lápis aqui colocar aqui aula e geralmente com as etiquetas né botar crédito fica bem na empresa

aqui mas quando etiqueta a gente ainda faz um um reforço de durex tá E aí E aí fica aí uma recomendação é que seria você identificar essas amostras antes não é identificar esses tubos na verdade antes de começar o experimento a gente começar a coleta e você ter todos os tubos de aqui dente ficaram está e depois de repente você já deixa todos eles com o volume de Carnot que você precisa por exemplo você sabe que 500 micro litros te atendi Então você vai colocar já em todos os tubos de a quantidade que você precisa

e quando você for coletar ou seja vai otimizar bastante a só seu procedimento tá bom É temos diferentes tipos de amostra aqui né que o fixo sei não é uma folha tem aqui alguns fungos né que a colônia fúngica que não vou abrir não tem problema Abrir porque de e esse procedimento eu vou descartar essa colônia então eu posso coletar de diferentes com eles eu posso usar um bisturi posso usar um cortador né vou usar esse cortador depois eu vou lavar ele né é o ideal seria você usar canudinhos autoclavados tá aí você sabe que

não vai contaminar conta das coisas tá limpinho e aí você tem por exemplo um Deck é cheio de canudinhos e você pode coletar umas porque você tem a 30 placas para mostrar você não vai ficar limpando Entre uma e outra né você vai ter um canudinho para usar para cada porta povo ainda você pode usar o verso de uma ponteira então você pode usar o verso de uma ponteira você pega aqui é uma colônia por exemplo ou furar aqui tá eu vou pegar aqui essa colônia vamos lá é bastante cuidado para não vou pegar aqui

no meio de Cultura tá evitando pegando a colônia se dá para ver aqui ou por dentro do tubo vou pegar um só é para algo ok vou pegar e fico sábado chega meu fique sabendo vocês e tendo um pouco aqui na teta Oi gente é outra observação do exemplo coloquei aqui tá encostando vidro encostei não no tubo mergulhei teve contato com fungo mesmo não vou voltar com essa pipeta lá tá bom e jamais não vai começar oxidar esse fixador e ele não vai servir para nada então tá aqui ou identificar isso amostras biológicas Mas se

você tiver que trabalhar com amostras de materiais né Por exemplo a gente tem madeira aqui tem osso ou os pedaços de telha né que a gente tem as membranas de Quitosana o like antes de carvão que a gente tem uma fenólica o que tem gesso e aqui tem emoções né na verdade essas emoções elas foram secas né e super-herói ou poderia ter sido também de utilizador tá então aqui é só manter não no ambiente com sílica-gel E aí colocar na fita de carbono então a Pitadinha Então vou montar alguns estados aqui né para vocês poderem

ver esse o telhado aqui na verdade já tá no meio que montado né esse telhado Nossa pedaço de telha daqui colado no estamos já pronto e não conhece esse aqui é um sabe tá se você quer de alumínio então ele tem cerca de 12 milímetros de diâmetro tá então eu vou colocar a Quina ou superfície a gente embrulha com papel alumínio porque fica bem mais fácil reutilizar depois depois se a gente acaba a amostra né adquirir as imagens a gente pega simplesmente Retiro esse papel alumínio e o Estado está pronto para ser usado de novo

tá então facilita aqui pra gente então Vou embrulhar mas alguns aqui ó e eu quero ter embrulhado melhores de sangue e já na vida a Olá tudo bem esses dois aqui bom eu vou colocar aqui a fita de carbono tá é que é uma fita dupla face E aí ah ah não é muito legal porque esse aqui de luva né mas vamos lá e vamos ver o que acontece é até que Deus é E aí Ah então tá aqui aí para usar a gente vai tirar aqui essa película não é outra coisa bem importante é

identificar mostra né essa esse estando aqui já tá identificado tá com etiquetinha pedaço de etiqueta colada aqui então ele já tá com a identificação por baixo aqui é bem importante porque depois que você cola tudo metaliza fica tudo muito parecido então é importante você colocar aquele edificação que cor de baixo tá ó e na foto de etiqueta a gente pode usar ficar crédito também vou cortar aqui no Pedaço adequado né E aí é isso aqui já tá aí identificada eu vou colocar aqui tá aí vou escrever aqui amostra amostra um por exemplo e nem sempre

dá para escrever tudo que você quer né na essas identificações porque elas são muito pequenas então é importante você a nossa na sua ata no só agenda enfim é por exemplo amostras o dia do dia dezenove vai 19/2 amostra um é amostra Santana não mostra dois à tona não então você tem Aliás o numeração você identificação de amostras salvo então aqui a gente pode colar por exemplo esse pedacinho de madeira posso colar aqui esse x indica a o lado certo né então é muito importante isso o lado que você quer observar ele tem que estar

virado para cima tá gente então você que é muito importante né se você colocar desse outro lado aí você não vai conseguir ver o outro tá então você se você quer ver os dois lados você tem que colar dessa forma metalizada depois de observado você vira arranca na vila de novo metalismo outra vida e você pode ver o outro lado Tá bom agora se você quer ver o lado que tá colado aqui na fita de carbono na depois pode saber que ele vai estar totalmente impregnado com a sua cola aqui com a fita de carbono

também tá então aí seria o caso de cortar mostra novamente e a gente pode colar aqui amostras como essas membranas de celulose né e pode colar elas aqui a observar a superfície ou pode cortar os de lado a mesma coisa vale para as folhas né eu vou colar aqui como exemplo mas eu gostei com tesoura Mas esse não é o método adequado Tá eu vou só colar aqui tá é o ideal é que você faça essa fratura com nitrogênio que eu vou mostrar um os cortes feitos com tesoura né o com gilete podem ficar bastante

e regulares né e podem não servir podem ficar bastante deformados né então eu vou colar agora é por exemplo esse essa espuma fenólica aqui vamos imaginar que ela não não fique bem aderido aqui tá Então a gente vai fazer aqui uma mistura de cola tá e com grafite é tão bem legal isso aí vou fazer aqui a nossa E aí a coleta de grafite E aí e para misturar aqui grafite com a cola e coloca aqui na a e colocar aqui na festa de carro tá e eu disse a gente vai deixar secar na estufa

também eu montei almoço bem sequinha tá nós estamos aqui alguns algumas amostras já pronto eu sou amostras que não vão precisar de preparo né vamos supor aqui no lugar aqui de só eu vou tirar aqui pra Mostra né ou preparar outra diferente né eu vou e aproveitar esses também que está aí eu vou Tira só mostra tá aqui no stub vou reaproveitá-lo eu vou colocar em vez de olhar novamente agora eu vou colocar novamente a fita de carbono E aí E aí a correr aproveita Opa a fita não coloque eu vou aproveitar esse outro também

tá eu vou fazer duas coisas diferentes Você quer uma das coisas que eu vou fazer é colocar um um pózinho né eu eu já usei tanto essa magnetita aqui o pozinho mostrei lá na hora da do slide né eu posso usar também esse as emoção aqui é seca em Delfim lisador tá posso colocar uma pitadinha dele aqui tá e caiu aqui um pouquinho ó tá vendo aí louco de uma batidinha akita e se não for nada tóxico tá essa emoção aqui são combinados de óleos essenciais com o objetivo de pesquisa em perfumaria tá então a

coisa tranquila que eu não tô muito preocupado com isso não tá bom gente então aqui tá ok tem um pózinho aqui e agora é só mentalizar né É uma pena talvez no sílica Gel um dia ou se der o vaco facilmente ali na no aparelho de banho de ouro quer dizer que ele tá pronto para poder ser metalizado então ele tive já tiver bem sequinho não acredito que está que ele tava na sílica gel já posso colocar ele lá para metalizar Tá bom então aqui a gente tem uma moto pedir emoção é o tipo de

preparo que a gente pode fazer aqui é de Suspensões que a gente tem fibras de celulose né então a gente estuda nanofibras de celulose aqui já tá decantado né teria que fazer uma higienização no Vortex sonicador né então vamos supor que ele seja homogenizado né vou pegar uma pipeta nova aqui a Lupita por amostra ou uma pipeta uma ponteira né que você fez automática se troca de ponteira nutre a nossas né eu falo a moto porque assim já fiz várias tá vendo esse tubo Falcon nessa tudo são amostras de nanofibras de celulose que a gente

já trabalhou então vamos lá a gente pega vamos imaginar que estão homogeneizado né o que a gente coloca uma gotinha prima e é só com a botinha e deixa secando ali no de secador Não não é um ambiente com sílica-gel tá bom potinho sílica gel quando a gente trabalha com Suspensões de células né A gente trabalha de uma forma diferente tá temos aqui um os nossos pensa que tem de fungo também o massa de bactéria e tem amostras fixadas de clostridium botulinum tá Não não precisa ficar com medo porque virtual e também tá fixado tá

já morreu isso aqui Mas a gente pode por exemplo pegar uma suspensão né É é de um ser interessante suspensão bastante concentrado mais concentrado possível e você coloca um volume de suspensão de célula de bactéria para um volume de fixador karnofsky Então você colocaria por exemplo né meio ml de suspensão comer ml de fixador Tá bom então mistura e é o suficiente para matar as células Tá bom então a gente não vai fazer do mesmo jeito aqui gente não vai colocar direto aqui na festa de carvão a gente vai usar outra estratégia que é o

uso da podem l-lisina tá bom é esse e a gente aqui tá pode tentar também a fita de carbono não é e depois você me fala como ficou tá é porque a fica de carbono não acho que seria adequado vou a suspensão e vou colocar em contato com essa foto ele lisinho para isso a gente vai usar lâminas de vidro tá baixar que a minha pizza né e aqui a minha pinça tão eu vou mostrar para vocês vamos hoje vidro tá para mim no circular velho tá mas tem aí para mim em 13 milímetros de

diâmetro né que é próximo do tamanho de súbito é a fingir que isso é crime Aconteceu Tá bom vamos lá então a gente usaria essa lâmina circular como o nosso suporte para a suspensão da bactéria a gente vai colar as células na polylysine e depois que o processo todinho terminar né as bactérias vão ficar aderidas aqui essa lâmina de vidro durante todo o processo né de desidratação. Crítico aí quando depois do ponto crítico você vai pegar colar a Quina no seu porta-amostra tá com a parte das bactérias virada para cima tá bom gente e aí

você vai me atualizar esse disco vai ficar com essa aparência aqui tá se eu pegar ela aqui um exemplo né É até da mesma bactéria acho que eu mostrei uma foto eu colorir né no quarto dela fica dessa maneira tá depois que me atualiza com outro E aí você colocando os bactérias e lá da calcinha você vai ver as bactérias você vira a lâmina ou para baixo você só vai ver a superfície do vidro superfície de baixo porque o Neve só vai te permitir ver superfície Tá bom não vou enviar através do vídeo Então como

funciona a cor e lisinho a gente tem um protocolo é esse protocolo tá na apostila tá foi de fixação gente pega a amostra cadernos e aqui a mostra a gente vai pegar uma pipeta né é porque eu tô automática e por ter os novos né a gente vai ajustar para 30 micro litros Ah e por Elise na tá o quê que 30 micro litros vou pegar que quando ele cima eu vou achar onde que tá a lamínula na aquela mina lá a outra já colei né então vamos como a noite e colocando uma superfície onde

de para enxergar lâmina ou tá eu acabei de achar WhatsApp eu vou pegar aqui colocar 30 micro litros não você pode espalhar para o cotonete isso aqui mas eu eu prefiro espalhar aqui nesse momento mesmo com a própria ponteiro Tá bom então vou espalhar bem aqui na superfície da da lâmina ou de vidro também se tiver mais almoça você vai espalhando né então é e sempre vai deixar essa panelize na a reagindo né Deixa eu ver se consegue focar em é só falta ela cair também né mas tudo bem já deu sim cair beleza deu

deu para ver né Tá bom então você vai deixar ela secando aí por 10 minutos tá depois 10 minutos você vai pegar e depositar 60 microlitros da suspensão bacteriana pode ser outro tipo de suspensão também tá pode ser suspensão de nematoide de protozoário e etc né então vou pegar aqui a bactéria temida a na construído botolino eu já posso 10 minutos na minha cabeça não posso saber disso é que a demonstração então eu vou espalhar bem aqui sobre a apólise na tá bom né Eu acho que 60 ficou demais Tá bom eu acho que 30

seria melhor então seu protocolo corrigir 30 para 30 porque 60 tá demais não adianta escorrer suspensão sobre a Luminus Tá bom então depois disso você vai esperar 20 minutos ou pode esperar meia hora tá pela secar bem isso aqui tá depois que tiver bem é bem sequinho né Você vai deixar a suspensão de cantar né as células ter em contato com a pode l-lisina tá bom E aí a cola catiônica né atualizo ela vai poder fixar de fato o gp as os elos né na lâmina de vidro tá depois desse processo você vai colocar a

sua suas amostras no estojinho aqui tá o sistema filmes todinho né fecha e aí você pode colocar essa lamínula que dentro Ah tá já posso a meia hora tá bom já O opa colocar aqui de uma maneira que dê para enxergar tá aqui dentro tá bom E aí a face de Face de cima né é onde tem o seu conteúdo seu material tá sempre voltado para cima aí você pode usar aqui agora uma nesse momento eu não vou fechar porque eu vou usar uma né seria bom fechar mas eu vou usar uma uma placa de

Petri bem pequenininha né que acomoda Exatamente Essa tamanho vou deixar aqui dentro e a parte disso né É só como ela já tá fixada né se você olhar no protocolo depois a fixação eu vou lavar com shampoo cacodilato a gente tem aqui vírus de descarte apropriadamente identificados né Depois eles são encaminhados ao setor de química da UFBA tá bom e a maioria desses componentes são recuperados e purificados umas sei que já estava fixado a gente vai colocar o e o próximo líquido aqui O que é um tampão eu vou lavar ou conteúdo não fixador que

está aqui na mostra da aqui o tampão também é feito tá isso tudo Eu tô fazendo na própria Capela Tá bom então aqui eu vou colocar o líquido tá então eu vou esperar 10 minutos tá eu vou remover se líquido vou usar outra pipeta tá e o remover esse líquido Depois de dez minutos eu vou colocar aqui no descarte de cacodilato tá bom E aí vou mostrar aqui que eu tô fazendo E aí eu vou pegar a pipeta nova né que eu tô usando só para esse frasco tá fica cor de lá eu vou colocar

o outra possante para ficou de lado né lavando pela segunda vez eu vou lavar por três vezes de 10 minutos tá bom gente sempre tirando com uma pipeta e colocando com a outra porque eu não vou me acordar a pepeta a e onde eu coloco no tampão limpinho né eu não vou figurar essa pipeta lá na onde tá a mostra Tá bom então essa pipeta é só porque a cor de lá do frasco e esse aqui é só do descarte é a mesma coisa vale para todos os reagentes tá E aí bom então eu estou

lavando o e o fixador na a cor de lato deixe por 10 minutos né e depois disso eu começo a desidratação é a cetônica tá depois o ponto crítico Olá bom dia a todos os nós estamos aqui de volta ao vivo na nossa aula o nosso curso online de microscopia eletrônica de varredura agora são 8:55 no meu relógio e continuando a sua prática e preparo de amostras né mas nós estávamos falando sobre preparo de amostras biológicas fisiológicas das nossas ruídos mas também e vamos falar sobre a frio fratura com nitrogênio líquido e até perfurar tudo

pode ser feito também para materiais nós temos aqui na nossa Capela é um exemplo né Eu acho que amor se durante a prática de neve é uma superfície que foi cortada com tesoura ou com uma lâmina não muito afiada ou até uma lâmina afiada pode causar algum dano aí eu vou mostrar agora ou menos tração de um corte feito com com navalha tá e uma foto de uma amostra né na verdade uma folha não corte de uma folha com utilizando nitrogênio vídeo tá vendo copos em nitrogênio mostrando aqui as deformidades né o dano causado e

corte com nitrogênio como que fica como fica preservado né na verdade que não sei no corte uma fratura no né então objeto fica bem rígido em na verdade gente faz uma fratura há uma quebra e ela fica com os tecidos bastante preservados nos locais onde eles realmente estavam Originalmente né então a gente vai mostrar isso agora mesmo tá isso vale também para materiais né como papel enfim membranas diversas Quitosana enche já fez essa comparação para diferentes materiais também é certo metais né então vários também só um pouquinho diferente mas quando eu é uma folha a

gente faz um mel fungos ou outros materiais biológicos e outros a nossos biológicas a gente faz um pré-tratamento usando uma esfera ao trinta por cento Ah tá entendi Lu irmã [Música] o cerol observing Us quem acredita porcentos água destilada e a gente faz um pré-tratamento para gente a proporcionar o tecido um a maior resistência a ao tratamento com nitrogênio líquido né esse tratamento se você não fizer né tratamento é um criar muitos cristais de gelo na e vão danificar o corte né de folhas fungos outros materiais biológicos tá eu tratamento crioprotetor você faz conectar com

o glicerol trinta por cento antes de fazer o corte mas Em que momento você vai utilizar né o glicerol trinta por cento bom nós falamos na aula anterior de preparo de amostras sobre a fixação né Nós somos fixa a microscopia de varredura carnovsky Depois tem período mínimo de 24 horas a gente começa o tratamento da mostra e quando a gente vai fazer isso tratamento com o nitrogênio líquido a gente não faz essa etapa de lavagem com tampão tá acordelado entrou direto para o tratamento contra o cerol trinta por cento por 30 minutos tá então a

gente vai fazer aqui um simulação para realizar a fratura Então vou colocar aqui ó Oi gente tá com a nossa moto lembra da aula prática tem umas folhinhas aqui agora a gente vai pegar substituir esse líquido e tem o nosso carnívoros que fez sem uma prova prática G1 a gente pegou né eu tinha a gente vai retirar esse líquido tá e colocar no descarte adequado de skate identificado karnoski e vamos colocar quilos ser ó trinta por cento só tenho cuidado de não né misturar as pipetas tá bom bom então vamos lá coloca o glicerol tá

bom e [Música] você vai esperar agora 30 minutos para fazer o cria um corte Então é bom sempre ter um né um timer ou marcas no celular bom vamos dizer que já passou 30 minutos tá bom então a gente vai agora fazer o crer forte vamos levar aqui nos a câmera até a nossa plataforma de corte nos exames simples aqui aqui nesse frasco a gente tem nitrogênio nem que tá é um o Tom ficar te amostro amostra on o pegar um tubo novo tá robô neste tubo eu vou colocar água destilada para receber o nosso

nossos corpos e é bom identificar tá bom sempre identificar colocar que a FIFA tão que a gente consciente preciso de um júri tá a gente vai precisar é bom não isopor onde a gente vai colocar o superfície metálica que a gente tem uma câmera antiga né que serve perfeitamente então a nossos perfis metálicos tá bom e a gente coloca aqui no isopor para não escolher o nitrogênio líquido a gente coloca aqui dentro desse copinho né a gente os cortes depois eles serem cortados tá Se tiver várias amostra é bom ter um copinho para cada mostra

que a gente coloca dentro de mim um isopor também para manter o nitrogênio o máximo possível dentro aqui de suporte mente ainda coloca uma placa de Petri e Caio aqui porque quando a gente faz a fratura os corpos costumam dar uma pulada né então a gente a ver alguma coisa aí Esse é o amor que tinha dito em líquido não preciso dizer que ele é perigoso né não tenha cuidado faço isso com a supervisão de alguém que saiba manipular nitrogênio líquido Vou colocar aqui né Vou congelar quero superfície metálica primeiramente agora eu vou colocar aqui

na placa colocar aqui nesse copos antes de igual receber os corpos tá e colocar aqui tá bom Então primeiramente eu vou colocar o corte dentro da aqui da placa e com cuidado para não danificar o pote tá bom gente vai pegar ele no cantinho aqui [Música] E aí E aí E aí e podes então tem esse barulhinho aí no final só fica congelando agora que que a gente vai fazer a gente vai congelar o bisturi também tá bom pode aproveitar aqui esse copo usar para isso também minha mão tá ficando falando da Quina o virar

canhoto tipo no momento bom então eu vou trazer aqui para perto a o Tom com o tempo a segurar kill né e para tirar minha mandou frente vamos você a câmera consegue a próxima bem fina e eu acho que agora está melhor eu não vou quebrar quebrando aqui almoço só é bem simples flor vai ser Brando depois como a gente vai fazer para montar os também gente vai colocar a mostra não invés de colocar assim a gente vai colocar né na horizontal tem que colocar o corte na vertical na vida de carbono simples assim agora

a gente vai pegar aqui os Portes colocaram resgatar aqui tá e como só tem uma mostra né eu não vou ter vários almoço eu vou resgatar direto aqui na água tá bom ficou ficar direto aqui no subo com água e me lembra aqui o corte passou 30 minutos no a solução queria protetora de glicerol trinta por cento são alguns cortes não ficar menores né porque né fratura com nitrogênio vezes causa disso é bom que você tenha várias vários pedaços da sua mostra Tá bom pode ser que ele saiu voando por aí sai aqui da caixa

e você acabe perdendo alguns não é bom cedo você ter vários várias unidades da só mostra Tá bom então gente pronto agora isso tá bom e quanto aos materiais né é celulose e papel outros outros tipos de membrana a gente corte diretamente Sem tratamento de Glee bom então vamos lá depois que a gente fez o cria o corte né gente já tenha a os cortes aqui a gente tem a aqui ainda a nossas não fixador Tá bom então a gente tem um almoço que foi cortada tem um mosquetão fixador da lo passado tem um e

o a dois a gente tem amostra aqui que a gente colocou no pole vizinho lembra o sistema lamínula de vida aqui com bactérias né a qual bactéria clostridium botulinum lembra elas estão coladinhos aqui nessa lâmina de vidro então aqui no fixador Tá bom então a gente deixou aqui pra gente fazer o preparo da morte então a gente tem duas situações aqui a nossa não fixador ainda e a nossa que saíram do fixador e já foram cortados e já estão no ar e deixar ela descansando aqui tá essa moça cortada e agora a gente vai tirar

o fixador e lavar com tampão café de lá tá então Cap tampão e oi Google eu vou tirar o carnotaurus que dessas amostras tá e colocar aqui no carte de Carnot só se for em amostras que não vamos contaminar umas às outras né vamos dizer que aqui tenha só folhas então uma moto não vai contaminar outra tá tá tranquilo mas se forem Suspensões alguma coisa muito pequena que você acha você tem um fungo cheio de esporos você acha que escolhe daqui vai passar para o outro vizinho então não tem como tá então você tem que

usar uma pipeta ou uma ponteira de IPTU automática para cada amostra Tá bom se não você vai contaminar uma mostra com a outra tá só se vai pegar aqui a acolhê-la e e colocar em cada mostra vamos tirar que eu fico sabendo também essa moça que tava aqui né na pouquinho de Petri um descarta e no descarte de karnofsky não tem um do carnoles que tem descarte dupla Cody lado Tá bom então a gente vai colocar aqui o pacote de lato para lavar essa moto também a gente vai esperar dez minutos tem cobrir a moto

tá bom isso é bom deixar fechado para nós ir lá furar Você vai esperar dez minutos e vai trocar por outra de qual cor de lado você vai fazer isso três vezes tempo a cola aí vou fazer aqui né e forma didática né porque senão você vai achar que eu pulei Então vamos lá colocar no descarte de crocodilo lato e rapidinho buscar tá se for de moto e e colocar um novo para a segunda dica kodilar [Música] gente é outra observação se você não encostar na mostra aqui né aí você pode voltar com ele pelo

prazo mas se eu sem encostou aqui contaminou não volto aqui para o frasco original deixou a pepeta Só para tirar que dá do frasco e outra pipeta para você tirar que eu descarte tá bom a honra evita contaminar o reagente esse aqui é um de aula prática isso aqui é só água tá eu fico de notas fake então não tem problema que misturar Tá bom mas eu não sei se alguém reparou eu errei o descarte aqui mas tudo bem então vamos tirar a última aqui de cálculo de lá tu eu já posso 10 minutos né

no meu relógio imaginário e essa moça dois pequenos lembra uma colônia fúngica agora eu vou colocar a última etapa e com a cor de lá vou esperar mais dez minutos tá pronto depois de dez minutos né relógio não dou eu vou tirar o time próprio de cá cor de lá tá bom [Música] E aí E aí a e agora que eu vou fazer Seguindo aqui protocolo eu vou agora posso tratar com tetróxido de ósmio Tá ele deve ser aberto somente na câmara de fluxo e né É extremamente perigoso e volate esse aqui também é é

um material fake né É tem que ser verde luva a dentro do Capela de exaustão de gases se você tiver uma máscara usa uma máscara de conflito de solventes orgânicos tá E aí você a você tem pé da como ele é perigoso a gente coloca dentro de um frasco com isopor né um frasco dentro de outro nesse com frasco de maionese tem aqui Um revestimento tá de isopor para o caso E aí no chão se por um acaso ele caiu no chão tem todo o procedimento de segurança eu não lembro as tem que jogar areia

óleo né Então tenha certeza que o seu o técnico responsável do laboratório está por perto tá neste trabalho é porque a troca de Oslo a verdade que tá microscopia de varredura aqui nossa aparelhos têm proporcionado bons é boas resoluções sem o uso de sacos de ossos em infelizmente a gente tem que usar ainda na rotina de microscopia de transmissão então é a que a gente vai simular né o uso dele é aqui na verdade gente usa a Bíblia automática e a gente coloca duas porções né na na mostra a gente coloca na mostra e coloca

por exemplo meio ml de ósmio Oi e me ml de água destilada tá então é um volume de um para um porque ele fica o estoque dele fica a zero dois por cento né E aí o a solução de trabalho e disseram um por cento então a gente coloca um para um de volume tratados de óleo e água destilada e a gente coloca aqui na mostra tá ó Oi gente já usou aqui o teclado de voz não sei se colocando-a na mostra aqui um é por exemplo né meio ml de água para mim ml de

hidróxido de sódio ficando é 01 por cento Não é esse tratamento aqui já eram por cento da história curiosa após o uma hora no ninho uma hora e no máximo quatro horas você vai tirar que o teclado de osmo e vai colocar Claro no descarte adequado tá aqui acredita tetróxido de ósmio [Música] é bastante cuidado que a gente segurança né e depois das etapa a gente vai colocar a gente vai colocar começar finalmente a série D1 o dissolvente né poderia ser acetona poderia ser etanol né que a gente também tem os gradientes de etanol e

e mais a acetona é faz parte da nossa rotina porque ela é mistura melhor com o CO2 do ponto crítico e também porque ele proporciona as menores deformidades aos tecidos tá então nós temos aqui na ordem deixa eu ver se consegue aparecer uma câmera todos eles então a gente tem aqui de 25 50 75 [Música] 90 e 100 porcento né a gente vai fazer essa troca a cada 10 minutos né então a gente coloca 25% espera 10 minutos tira a de 25 porcento coloca e aqui no descarte de acetona para então vou fazer a primeira

pedido só para ilustrar a gente vai pegar o Acácio de 25 porcento aqui né tirou o teclado estudiosos me ou se você pular o tetroxide óleo que é o que a gente faz né sair então direto do cacodilato a gente sai direto do carro de lá tu e vai direto para você toma tá depois que a cor de lado a gente coloca acertando de 25 porcento a gente tava três vezes com o cacodilato e já vai para esse aqui se torna 25 então a gente coloca acetona 25 né coloca ela de lado para não confundir

e depois de dez minutos né deixa fechado que o negócio foi lá a gente vai pegar aqui Como remover colocar aqui no descarte de acetona estudo com a a capela de exaustão de gases ligado É claro que eu não liguei porque eu tô com reagentes fake e também porque senão o áudio ficaria terrível aqui nado o nosso vídeo então a gente tirou a de 25 coloca de 50 tá e assim por diante quando chegar na de 100 gente vai fazer três vezes Tá bom então vou colocar já diz hein vamos supor que esteja na última

etapa de 100 tá bom o jogo colocar a terceira de 100 né Cada cada solução né cada etapa é de 10 minutos tá bom você já imaginou o tempo que gasta né e tem 25 seus 25 50 75 90 100 tão 3D sem vai dar sete no total Então pelo menos uma hora ideia se você tava tirando essas pequenas intervalos de troca uma coisa muito importante que eu tenho que falar é o seguinte se você tirar um líquido aqui né não é o eu tirei uma cetona de 100 ou colocar a próxima não é um

exemplo mas vale para todas as etapas se você deixar esse tubo que vazio É muito tempo Imagina você tira ele depois vai conversar vai responder mensagem vai no banheiro volta isso tudo que tá vazio Sem líquido você não recarregou com outro líquido com o próximo solvente ou seja o que for essa mostra vai deformar tá bom ela você vai perder a nossa ela vai ficar toda detonada vai te informar mesmo então não demora para colocar o próximo somente tá bom essa dica super importante Tá bom então não demora de colocar a o próximo somente faz

isso rápido se você tiver muito almoça vamos por você tem 20 amostras aqui 20 e Poucos tira o link de 10 se tiver uma pessoa para te ajudar já vai tirando e a e não vai recolocando o próximo e aí vai vender bastante seu trabalho ou faz aos poucos né parei de cinco em cinco né tirando e colocando é uma dica aí tá bom antes da gente levar lá pela parede de ponto crítico eu vou comentar uma coisa que é o seguinte se você é fez a fixação fa70 por exemplo né então você vai fazer

né o seu Gradiente com etanol Tá bom então você vai fazer com 89 89 90 três vezes de 100 vai fazer o ponto crítico com etanol Tá bom então se você for fazer teste lembrando não faço com todas as suas amostras faça com uma pequena quantidade para ver se fica bom né se não você vai perder suas amostras nesse nesse teste Então vamos preparar agora mostra para entrar no ponto crítico como eu mostrei anteriormente é mas tem um diferentes tipos de suporte para entrar lá no ponto crítico as amostras uma ficar imersos na no solvente

né nesse caso que acetona e você tem que colocar num recipiente e que permite a entrada e saída de líquidos né como esse polímero aqui parece o Isopor pode ser né outras outros materiais né como a gente mostrou na aula passada né pode ser esses todinho aqui né que a gente vai a gente vai fechar ele aqui daqui a pouco e não pode faltar a identificação dos da da moça Então a gente vai colocar a identificação em lápis porque senão que se for de caneta vai soltar tudo então vou colocar um A1 A2 A3 tá

e na eu esqueci desse essa moto que foi cortado né ela teria que passar pelo pela acetona também tá bom Saiu aqui da água vai para acetona 25% ou até sem vamos pouco aqui já tá na acetona 100 porcento tá então você quer A1 A2 A3 e essa costura de vô Toninho na água mínima de vidro Napoli l-lisina vou chamar de a quatro Então você vai escrever isso no seu caderno protocolo para não perder tá vou tirar uma foto e mandar para nuvem né é bem seguro também não é bem mais seguro você não perder

Aí eu sou identificação Então a gente vai cortar aqui o nosso identificação e tem que usar uma pinça para coletar identificação né a quatro é aqui a nossa clostridium botulinum um a amostra as outras amostras eu vou colocar dentro desse container e vou colocar virado para cima eu enxergar aqui dentro tá então essa aqui é a 1 em Face da prova ia aí mas eu coloquei a identificação de uma forma que eu consigo enxergar [Música] o pão colocar os outros aqui a três vou colocar o a dois tá bom E aí o certinho agora o

que eu faço eu vou colocar acetona 100% aqui tá E aí [Música] e como esses recipientes são né eles todos eles permitem a entrada da Luz líquidos netos prometido acetona então aqui dentro já tem acetona Então posso colocar minha moto aqui dentro tá então eu vou conversar aqui a mostra um Vou colocar aqui dentro pegar que é mostrar um pouco bastante cuidado tá eu vou colocar aqui dentro então eu vou tirar aqui só para mostrar para vocês né amostra a ela não tá aqui dentro tá então da mesma forma não vamos dizer que eu já

tenha colocado tudo ali Esse é um detalhe que às vezes não é bom abarrotar muito amostra ficar dois abarrotar mostra lá dentro do do container tava Porque isso pode fazer com que só mostra uma [Música] esmague a outra né bom e depois elas ficam todas coladas lá dentro ficar bem complicado depois você parar Então se for possível separe bem né as suas amostras aqui esses aqui são os cortes né que a gente fez um nitrogênio líquido é outro detalhe bastante importante que eu não comentei né aqui já tá no nascer Vamos ser por cento tá

E aqui já tá quase pronto né Vamos colocar a tampa né gente pode colocar dessa forma em São Paulo pela nossa moto não ficar perdida lá dentro né do aparelho e e foi mergulhar ela lá tem desocupado táxi é só outra mostra como o câmbio que a outra colocar aqui dentro tá só para você ver que eu vou fechar ela aqui o estojinho [Música] com a menina de vidro eu poderia colocar também dentro de um pacotinho lá de papel né um papel que resista a acetona né o tratamento todo né ela fica eu pago você

colocar o papelzinho aqui dentro né mergulhado da mesma forma né seria uma forma de fazer por exemplo esse se filézinho né enfim menorzinho mas que tá muito grande é um outra coisa importante que seria a vamo começo né É se o sua intenção é fazer todo o processo do ponto de ponto crítico né para ter uma qualidade morfológica boa e também queira fazer análise de elementos e seu objetivo estudar teores de cálcio né na sua mostra é importante você fazer um tampão com fixa do car novos que modificada tá bom gente outra dica muito importante

o que no nosso caso aqui a gente tem esse a série 2 então a sua mostra vai ficar totalmente impregnado com calça quando você for lá na microscópio então ele vai fazer o seu carnoles que sem esse elemento né mas preparar ele diferente aí Tá bom então se você quer identificar sódio mesma coisa muitas vezes que a gente faz é não fazer nenhum preparo o presidente da uma secadinha estufa ou deixa não deixa não num recipiente com sílica-gel né aquilo até mostrar logo é um recipiente que consigo ficar gel e aí você a gente bem

fechadinho e aí você depois vai direto com etapa de cobertura com carbono que a gente vai mostrar daqui a pouco outra observação é que eu não falei Anna a aula teórica Eu acho que eu esqueci aí que o seguinte eu falei sobre amostras condutiva senão e não condutivos né moço competitivo os metais etc ele é nossos não condutivos por exemplo biológicas Se cobre com o metal né com ouro geralmente com carbono e aí você consegue uma melhor resolução você consegue ter uma resolução e sem aqueles acesso de carga né você o shard vem keraku a

cargas negativo cede elétrons que ficam sobrando nas superfícies quando você usa né tem dois pelo menos dois colegas aí que usam o sistema de baixo o vácuo ele é um pouquinho diferente o que é para evitar o Charles você simplesmente a baixa né além de abaixar um vácuo né eu vou e você abaixa também a vontade e aí você Evita o Charlie Mas como você diminui a voltagem a qualidade das amostras não é a mesma pelo menos não se você aumentar na vinificações muito altos né se você quiser trabalhar com a altos magnificações não vai

ser um trabalho legal então pelo menos na questão de morfológico mas se você quer né Por exemplo os colegas né O André trabalha com insetos EA Renata trabalha com tricomas Então você precisa pouca na vinificação nesse caso é é uma imagem ok né e agora é voltar aqui é o ponto crítico né que a gente vai completar a desidratação né do material no aparelho de ponto crítico para depois ele pode ser metalizado e observado no médico Tá então vamos voltar aqui nos amostra né tá aqui nossas amostras estão prontos para entrar no ponto crítico primeira

coisa a gente vai ligar ele tá gente vai ligar 15 botãozinho aí ele vai mostrar a temperatura primeira coisa que a gente faz é mandar ele resfriar Tá bom então a gente vai pegar aqui colocar carregado com o nosso vem aqui não fazer acetona vou colocar um pouquinho só porque a gente tem pouca mostra hoje tá só suficiente para cobrir a gente vai pegar aqui nós não vamos e colocar akita a pedir uma foto você não me no meu dinheiro meus pouco triste que eu ficava em cerca de uns Bom dia onze um container de

deste lindos né parece um isopor colocar um pouquinho mais eu sou toma quando eu Camp Zinho aqui sobre os almoços para elas ficarem no mergulhado e agora a gente vai fechar a já fechamos e vamos aqui abriu CO2 estão vamos começar aqui com quatorze meses e como tudo é uma simulação que vai ligar aqui assistir [Música] vou apertar o milho um tá então a gente vai injetar o gás CO2 só e nesse momento ou não não entendeu subir e bom então a gente olhar aqui ó um espacinho aqui tá vendo um tremor aí na no

líquida que estão disputando o gás o nick do céu dois então vou desligar aqui assim gestão de gás né a pressão aumentou não temos aqui agora quando ele te apertou o Miguel o áudio né gente parou de um dia tá o céu doidos ligou-me de mim e a gente ligou mídia o áudio que que você quer dizer que que está abrindo a válvula para deixar evaporar a acetona porque quem vai evaporar com essa temperatura e pressão é acetona então tentam barulhinho se vai ser na gravação que é da evaporação da acetona a pressão é baixar

tá E vai despressuriza logo a gente vai desligar esse dispositivo ficar um direto é dois novamente pressão vai subir eu fiz ouvir que o nível do líquido vai subir aqui dentro tá então o líquido o nível do líquido tá aumentando porque ele está injetando o CO2 na forma líquida a pressão está aumentando eu vou deixar a pressurizar o a ver bastante e vou desligar e vou liberar vou te especializar em bom então vou deixar aqui o a acetona escapar Então tá vendo líquido ele tava achando eu vou interromper nesse momento porque ele ele não pode

abaixar de forma aqui a mostra que que tem líquido tá então vou dia posso abrir novamente e essa esse nível vai subir vamos lá ó tô vendo tu líquido tá subindo Então a gente vai fazer isso seis meses tá certo a gente já fez duas vezes e fazer mais quatro e a gente vai interromper aqui tá a o líquido tá cobrindo só nossos Ok então a gente vai interromper nesse momento vou desligar aqui o estilo vou desligar o cone ó e vou desligar o cilindro só dois bom nesse momento né gente vai a permitir o

aumento da temperatura tá a gente vai desligar aqui o ritmo o E lembra o ponto crítico do CO2 é a 30 graus Celsius nessa pressão que ele tá então a gente vai deixar o o aparelho esquentar e a gente vai deixar ou CO2 gasoso né que vai ficar cada vez mais predominante nessa mistura de CO2 líquido e gasoso né porque no ponto crítico ocorre a as duas fases ao mesmo tempo ali que ele gasosa A essas alturas o acetona foi totalmente e já descartada foi substituída pelo CO2 líquido Tá e agora o nosso tarefa vai

ser substituído todo o CO2 o líquido para o céu dois gasoso vai passar pelo ponto crítico e do ponto crítico para a predominância para a presença apenas de sol dois gasoso que será liberado né pela pela válvula a está gente vai liberar né Na hora certa essa válvula de uma forma bem gradativa né a gente vai acionar que o gás ao e o céu dois vai ser liberado a gente vai acompanhar através esse aparelho de leitura de fluxo essa bolinha vai ficar flutuando aqui é que o fluxo não seja muito intenso né para ter certeza

para garantir que o escape do CO2 vai ser bastante grave ativo não é tudo isso para a sua Nossa não deformar tá no final do processo vai ter apenas céu dois gasoso na sua almoça no conteúdo da O Conde havia algum dia líquido até apenas CO2 líquido e depois apenas CO2 gasoso Tá bom então que já até 20 graus Oi e a gente está quase chegando lá temos aqui a temperatura de 32 graus vamos começar a despressurizar o sistema gás aut e começar a liberar aqui a nossa válvula tá vendo ali a bolinha estou aqui

né abrindo aos pouquinhos eu tenho que tinha bolinha e a gente vai esperar essa bolinha né Vou esperar o gás sair né É só para não deve agarrar lá em cima se ela agarrar você fecha um pouquinho a volta então falei o que é um processo bem gradativo né todo ele deve demorar cerca de uma hora dessa boa minha a Sentada né na base desse minhas furador de fluxo quer dizer que o CO2 já foi também boro tá então parece que já é já abre a válvula completamente essas alturas e a nossa bolinha já aterrissou

Então nesse momento eu posso desligar que o ritmo ao crescimento Posso desligar o gás alto e posso abrir a válvula e já desço pressurizador né gente pode até conferir aqui no meu nome então despressurizou obre o resgate e mostra que foram dissecados e vou colocar dentro do nosso eu vou colocar mento do nosso próximo com sílica-gel Então vamos lá Mila é que a lâmina Ou coloca aqui ó é aquilo é o container boca todos aqui o PIB shot dentro Até eu conseguir ter um tempo de montar o stand ele lá no ponto crítico dentro desse

container a gente vai abrir esse com tema Geralmente eu uso uma cópia de pedra e nós vamos ver se o tanto aqui eu abro não é abre o meu presentinho o derrubar ele aqui dentro vou ver a identificação que vai estar aqui dentro tá então a mostra um Vou colocar aqui ó e eu vou olhar superfície de folha tá então se eu não tivesse segurança de montar o estaminé aqui tem as amostras secas né que saíram aqui do container veio lá do ponto crítico Tá bom então eu vou ter que seria bom que você fizesse

um almoço de cada vez tá Para não misturar tá ou placas separadas até para você não misturar você não tem segurança de identificar o lado certo né seu lado não é problema caso de folha até a face adaxial e abaxial se você não tem segurança hora na lupa tá para você ter certeza Qual que é o lado que você tá escolhendo então aqui vamos supor na mostra onde eu quero ver o lado abaxial não tem que a gente pode colocar bastante pedaços aqui no estou Guiné preocupar melhor espaço dele então há uns quatro pedaços tá

os quatro pedaços de cercar me bem cabe bem aqui tá então tá aqui a mostrar um vamos pegar o nosso pedaços da mostra a dois tá um super que seja uma folha também só que o lado [Música] e abaxial o Colatina supor que eu usei a lupa para verificar o lado certo no caso é dos cortes né eu poderia colocar de duas formas ou eu pego esses fragmentos e coloco eles todos num instante só para isso tá oi ou me coloco eles junto com [Música] sei se vai dar para focar e e junto com os

[Música] e as amostras de superfície e colocar um aqui e junto com amostras de superfície e E aí [Música] Ah tá bom então pode colocar junto que rende espaço também se pode usar menos estamos né e render mais do seu trabalho agora eu vou pegar uma lâmina ou de vidro e tirei lá no ponto crítico vamos dizer que a sua moça você tira do ponto crítico e não pode montar né no no momento exato O que que você vai fazer você vai pegar colocar colocar colocar numa caixinha com sílica-gel tá tá ó e vai manter

é só mostra guardado aqui tá bom tá bom você vai deixar só almoça aqui sequinha serve ponto crítico ela não pode pegar umidade de novo você deixa ela quietinha aqui eu vou Vale casa nossas que estava aqui nesse contente tá mas se você vai montar como pegar aqui montar um O Mateus também tá que tiver abrir e a muito cuidado para né não é virar né colocar o lado errado porque senão você não vai ver bactérias você vai ver só lâmina de vidro Então vou tirar aqui o adesivo ou o arcadismo sair sair então eu

vou pegar aqui a lâmina de vidro né que dentro vai ter o papelzinho para identificação ao suporte ele tava aqui né o papelzinho que identificação e às vezes a gente corta os discos de papel né e do tamanho aqui do diâmetro e coloca vários umas cinco lâminas de vidro no mesmo estojinho para vender espaço tá porque não cabe em tantos esses todinho lá no ponto crítico talvez uns cinco seis no máximo Então a gente consegue otimizar o espaço e o lado de cima o e colando aqui no Instagram que agora você vai dar o banho

de ouro então agora se montou standby ou você coloca aqui na se você guarda aqui no para na caixinha com sílica-gel né e é bom a caixinha bem vedado né é que a gente tem esse não precisa necessariamente ser uma tô com ela né mas isso aqui é São Remo né menos caro nem mas tem aqui esse essa vedação de borracha bem bem decente né então vai segurar ao máximo aqui ah ah só secagem vão falar sobre um detalhe e essa sílica gel ela é pigmentado então quando ela tá seca ela fica na flor azul

mas quando ela é quando ela é adquire imunidade né que pode acontecer depois de um tempo ela fica nessa coloração Rosa né então que que a gente faz a gente pega gostasse Lika Rosa ET remove substituído por uma silhueta sequinha Azul nessa que tá precisando trocar e já né e que Oi gente pega a sílica Rosa que já tá úmida coloca na estufa deixa secando que ela vai vir adquirir a cor azul Então é só reutilizar tá sem problemas então gente deixa aqui na nossa caixinha e eu te identifica né as amostras né E tinha

etiqueta de identificação cola aqui e aí tá pronto só que não tá porque a gente vai fazer a metalização agora tá bom gente vai fazer aqui o tratamento de metalização com outro para recobrimento de fração e esse aqui e aqui a gente amava né Fala fio de carbono nós vamos colocar aqui que os carbono ou mostrar aqui embalagem dele está na pesquisa de carbono deixa eu abrir aqui ó um membro esse metros aqui de ficar bomba é você pedir r$ 500 bem Casa limpa gente vai colocar ele na esquina direitinho vamos pegar a nossa que

que a gente vai usar tá colocar ela aqui ó E aí E aí e com que essa membrana sozinho aqui de celulose e a gente fazer análise de raio-x e vou colocar aqui é só suspensão né se eu não me engano era uma suspensão de celulose eu vou tirar a fruta interior né que já foi queimado né O que ocorre aqui realmente uma queima do desse fio de carbono e o que é a dúvida vocês podem mandar por e-mail né Sei que você não paga nem a gravação mesmo e é bem mais legal ao vivo

né Eu sei mas infelizmente a gente passou por imprevistos aí vamos lá ó bom então eu vou colocar aqui né só fica de carbono que é uma tesourinha aqui eu venho aqui 18 né na suporte e essa fita vai queimar né o McQueen mande forma a cobrir os a moto então no começo ele fica aqui fechado tá e são tem aqui uma posição ou perigoso e ele vai ficar aqui no pouso para não ficar em contato com as amostras no primeiro momento Então a gente vai aqui fechar aqui a porta mostra né e colocar sobre

fechar tampa direitinho e colocar os eletrodos estão aqui atrás tenho que a marcação certinho né o preto Amarelo positivo negativo Oi e a gente vai ter mais barulho do que vai ter ou tá bom Outra bomba de vácuo aqui né se você tiver um protetor de ouvido ou um fone de ouvido para proteger né resolvidos é interessante tá só um a gente vai esperar o vácuo a também né chegando. Certo antes de realizar a queima e a né Tem esse papel de queima as etapas de alta voltagem não é de alta corrente Então a gente

tem que fazer suas etapas sob alto já existe uma estratégia interessante para esquivar-se alcançado mais rapidamente que abaixa essa mesinha e eu levantando ela aos poucos tá vai levantando ela aos poucos se aproximando E aí você vai ver que o manômetro vai respondendo tá vai subindo essa mesa tem que chegar até pelo menos desse fizeram um aqui tá bom a gente vai vamos esperar dinheiro tá e aqui a gente tava famosa vou aqui aumentar né vou encandecer né amostra Tá bom a gente incandesce aqui por 120 graus por 16 segundos duas vezes esperar um pouquinho

tá eu vou encandecer de novo vamos lá vou girar essa válvula aqui até a temperatura de 120 vão lá vão esquentar esse negócio aí ó é queimando nela a FIFA o fim de carbono agora que que eu vou fazer eu vou abrir aqui para e liberar né para ir para essa esse carbono queimado que a em cima das amostras agora eu vou aplicar outra corrente aqui só vou apertar esse botão e agora ele vai fazer chover esse carbono sobre as amostras estão nesses etapa né A essas alturas já terminou Tá bom então a gente vai

tirar que os eletrodos a tirar a tampa assim que o vaco a quebra do vácuo permite tá é bem rápido né então toma cuidado que ficar quente tá essa superfície Talvez esse filho de carvão de pé usar umas duas vezes né mais uma vez nesse caso e aqui a gente tem as amostras já coberta de carbono é só é um filho de carbono de alta qualidade né ele cobre bem as amostras tem os fios de baixo qualidade que realmente não fica bom tá então aqui tá pronto a gente coloca dentro do recipiente com sílica-gel gente

vai deixar que ganhar fechar não é fora essa não vai adquirir umidade de alguém aí esse aparelho aqui é o metalizador eu não escutei de ouro tão vou abrir aqui ó esse livro dele colocar esse apoio aqui né provisado né ele está com um probleminha né a gente colocou esse apoio não é bem bonito aqui embaixo tem a placa de ouro dele tá vendo aqui dentro do grande fica os famosos e a gente vai pegar aqui as amostras que a gente vai cobrir com o ouro que a gente tem pistas antifurto né Tá vendo estão

presa aqui com barbante a gente vai pegar que vocês a moto é só mosta assim não tiver pelo menos passado pela estufa você vai ter problemas né aí o vácuo né aqui vai mostrar o nível do vácuo então a gente vai perceber que o processo vai demorar mais do que deve posso deveria demorar meia hora eu vou demorar uma hora uma hora e meia e a gente não sai daqui no canal Então a gente vai pegar aqui fechar ou Câmara das amostras tá bom e são como vamos ligar o aparelho então a bomba de vácuo

vai começar a funcionar Tá bom e aqui a gente vai iniciar o nosso processo a gente vai acompanhando aquele nível de vácuo e me ligar e aí ele vai ter aqui ó que ele vai começar a substituir a atmosfera aquilo porta nossas né que tem a né o ar atmosférico a gente está e vai começar a injetar argônio tá pode substituir conheci a por argônio 1 e a gente vai apertar o senhor mesmo para ele encher até agonia cada vez que alcançaram vaco mínimo marcado pela pela luz verde a gente vai dar uma injeção de

argônio então enquanto autor sendo retirado a gente tá injetando também lavando que a gente está fazendo é fazer uma atmosfera modificada a gente tal substituindo-a pelo argônio né na verdade então a gente vai esperar esse vácuo chegar a essa faixa mínima aqui antes de 10 a menos um né e vai ficar vídeo aqui e a gente vai substituindo por argônio então eu tivesse esperar um pouquinho aqui e isso pode demorar mais ou menos dependendo do nível de umidade das amostras que estão aqui dentro e o nem me arrisquei a colocar uma mostra ele que não

foi de ser cada não foi a tu não falou que se quer na estufa nem na sílica gel deixei ela secando naturalmente na bancada enfim eu não espero que isso aqui vai ficar com a qualidade muito boa sabe mas a gente vai cobrir com ouro e vai dar para ver que vai ter ouro na mostra aqui as imagens já não garanto que vai ficar aquela maravilha né pelo menos não no sistema de auto vácuo tá a gente tá falando sistema de auto vácuo que a gente está mentalizando para isso então falta um pouquinho para chegar

na falta mais um para ele chegar no vácuo mínimo para injeção do argônio e chegando lá a gente começa em o processo ficou verde ou dar o riso em e então ele vai voltar um pouquinho injetor gonew vai ficar verde outra vez tá eu apertar o riso em novamente bom então você repete esse processo seis vezes e que a gente vai fazer a gente vai esperar o vaco chegar no nível para o tratamento das amostras para também te disse Tá bom então vai ficar aqui na cor verde e essa cor verde que essa luzinha vai

andar até aqui no local uma festa é marcada aqui de canetinha vamos fingir que esse voto já chegou até o ponto desejado a gente vai abrir aqui é a placa e vamos acionar o sistema o que que tá acontecendo as partículas de ouro né estão sendo ionizados tá chovendo ouro lá dentro esse processo demora 4 minutos tá 220 segundos Então tá aqui o time contando tá a gente faz o que desliga respira aliviado porque a bomba de um disco o nosso cabeça vou abrir aqui nem assim que o vácuo permitindo a quebra do vácuo permitir

a gente vai abrir aqui e ela será a nossa metalizada pronta para ser observado no médio a gente coloca né da mesma forma aqui nós fica pra manter ela sequinha até a hora de ir observando ao microscópio de varredura então Cia Só se você pretende fazer né a observação do mesmo dia no dia seguinte na semana que vem é tudo bem É né é bom você programar né que que você faça só a minha atualização é o pouco tempo antes da observação neve porque o que essa metalização ela é uma camada muito fina e ela

descasca com muita facilidade então E você tá trabalhando né de novo no sistema de microscopia de varredura de Alto vácuo né com alta voltagem Então você vai ter um processo de chardy Então se isso acontecer a minha tá língua de novo mas para evitar né esses problemas tenta fazer essa metalização um pouco tempo a gente se você observar o nosso semana antes no máximo no mesmo dia um dia antes seria ideal tão grande abraço até o próximo tchau