Aula - Transcriptoma e suas aplicações

o olá pessoal meu nome é pedro gabriel nati eu sou biólogo mestre e doutora em genética e vou apresentar uma aula titular da transp toma e suas aplicações ou na biologia umas das coisas mais intrigantes com complexo um indivíduo organismo pode ser né por causa do humano com complexo é toda a estrutura do nosso corpo com diversos órgãos e tecidos diferentes e diversos tipos celulares diferentes que todo o conjunto geram um indivíduo consegue realizar as mais diversas atividades diferentes né então não sou nível o celular só complexidade como se tivesse tipo celular diferente mas também

temos uma alta complexidade a nível molecular dentro uma única célula este mostram complexidade de mecanismos e vias atuando ao mesmo tempo e nos pontos mais interessantes o que existe para biologia é como que a partir de uma única célula com o mesmo material genético de consegue criar vários tecidos diferentes como é o caso dessa única célula acontecer a fecundação do óvulo com espermatozoide e a partir disso vários tecidos foram formados para formar nosso então nós temos músculo fígado tecido nervoso osso pele e tudo isso veio de um uma única célula começo material genético ou seja

todos esses tipos celulares diferentes que temos tem o mesmo material genético além disso esse material genético dentro dessa única célula pequenas alterações nesse material genético podem gerar essa grande quantidade de seres vivos que o nosso planeta a gente observa o nosso planeta hoje em dia né então seja mais diferentes formas observadas aí que vai de uma simples baratinha a um elefante uma girafa eu vim de algumas pequenas alterações acontecerão material genético e ao longo do da evolução então o que causa essa grande complexidade biológica observada na observada na natureza de um dia então por muito

tempo achava-se que estava relacionado com os renome se é o genoma é quantidade de material genético presente na célula famoso dna né e o que observa sim é que não se tem uma relação de da quantidade de material genético ou complexidade considerável do organismo componentes pode ver aqui neste gráfico na neste o y nós temos o tamanho do genoma né então temos aqui um padrão do tamanho de tamanho para vírus bactérias fungos indivíduos protistas ela só de plantas insetos e não estamos aqui os humanos está aqui nos mamíferos né então seja tem uma gama de

de animais que são é mais basais que nós e que possui uma quantidade de material genético ser muito superior ao nosso então tem esse muito discutido atualmente na ciência que ia observado uma grande relação o que a regulação e as sequências regulatórias dentro de organismo é que tão relacionado complexidade biológica daqueles organismos certo e atualmente vários estudos têm realmente demonstrado que essa relação é verídica como por exemplo para vocês terem uma noção da totalidade do genoma numa célula por exemplo apenas setenta por cento dela vai ser transcrita ou seja apenas setenta por cento vai corresponder

ao reais desses setenta por cento apenas cerca de dois por cento corresponde ao genes codificadores proteína ou seja de setenta por cento de coisas são transferidas pequena quantidade vai virar proteína isso altera um pouco aquele pensamentos e tinha um dogma central da biologia né onde um dna uma sequência dna vai gerar uma molécula dna que vai gerar uma proteína e essa proteína vai exercer a função dentro das células e diversas funções interessa a ação da expressão de outros genes deve destinar mais considerando que a gente tem uma grande quantidade de transferidos que não são modificadores

proteína também sabe-se que diversos rn as que são chamados não-codificadores eles podem estar exercendo diversas funções dentro das células então já foram relatados diversas interações de moléculas de rna não-codificadores com moleka 100 né codificadores realizando uma regulação interação de moléculas rma com dna rna e proteína e alterando totalmente a função de uma proteína muitas vezes então a partir dessas descobertas tem-se atualmente que é chamado do mundo dos reais né então nós temos diversos tipos de rn as escritas atualmente são rn as mensageiros os famosos e bem conhecidos e para todos nós que estamos que vão

que eu disse sua mensagem codificada em proteína e temos rn as não-codificadores em proteína o que são os não pescadores onde são rna transcritos que podem ter um papel estrutural um papel regulatório e dentro de nós temos diversos tipos descritos como por exemplo citam alguns exemplos aqui é um ferry bolso mais e onde desse participam da síntese proteica ou seja se tem um papel estrutural no complexo ribossomal tem uns rs transportadores que vão transportar os aminoácidos para proteína que tá sendo sintetizada o crm as os esmaltes nucleolar que fazem parte do spliceossomo que a maquinaria

que de que modo os íntrons dos genes que estão sendo transcritos por exemplo temos pequenos rn as que são muito tratados atualmente na biologia como por exemplo me creme as irmão steffens e pierre nas que eles têm um papel regulatório de silenciar genes e alguns outros por exemplo como maior reúne as maiores que se podem estar relacionados com a textura ação da cromatina e o imprinting genômico e alguns deles até que servem como esponjas para outras moléculas dentro da da célula bom então essa ideia de dessa grande quantidade de ns não codificador de proteína que

foram sendo descritos e que estão sendo continuamente descritos acabou mudando um pouco a ideia do dogma central da biologia então como entender isso principais é áreas estudo dentro da ciência hoje tem que nós podemos estudar dna para poder entender o genoma da espécie tão tenho que a transferir porque a reunião onde a gente vai estudar o transcriptoma tentar compreender tudo que tá sendo transcrito que pode ter um papel funcional naquelas célula naquele momento aquele devido uma aquele órgão a proteína onde existem trabalhos ah que bom que estudaste potência aqui são trabalhos para ter uma e

a função do do que a transportou me para ter uma que é chamado de genômica funcional que é para tentar entender a função de cada um desses moleques estão sendo produzidas pelo génio humano bom então o trânsito me se considerando que a gente tem uma grande quantidade de índice transcritos e só alguns mão se transforma proteína acaba tem uma importância muito grande tem recebido uma grande importância nos últimos tempos paciência então estudante asp toma que são os rns expressos de um genoma pode revelar toda a complexidade da expressão gênica e das processos regulatórios contam é

bem discutido que a outra se toma podem nos dar uma direção para entender algumas patologias e diversas outras doenças bom então agora isso temperaturas pitomba não é uma palavra difícil talvez esteja se perguntando pouco mais igual o chaves né transcript ou que o pensando aí você pode comprar outra sintoma quadrada igual kiko entre outros e deve estar matutando um pouco né que é isso né então para isso que tem essa aula aqui para tentar explicar tirar suas dúvidas para vocês né então nós vamos tentar explicar o que tanto o que é transferir toma fazer uma

breve explicação sobre a análise dos dados de trânsito toma como acontece uma montagem uma expressão diferencial e demonstrar algumas aplicações práticas das análise toma como a expressão gênica de pressão diferencial detecção de isoformas identificação de novos transcritos sequenciamento de genomas de vírus identificação de rede de interação gênica bom então temos seguinte tópico para aula o que é trânsito toma quais são as tecnologias de sequenciamento e análise dos dados dna seque a montagem diferentes tipos de montagens e análise pressão diferencial e as aplicações de artigos publicados em desenvolvimento no momento bom então o que é câncer

toma eu estou transcriptoma basicamente é o conjunto dns transcritos de um tecido ou célula de um organismo ou no caso organismo celular é o renato tá escrito inteiramente por aquele organismo então eles dentro do trânsito toma né esse conjunto de n atualmente já viu responde separassem nessas codificadores de proteínas também chamado eneias mensageiros são os rs possuem informação para ser traduzido em proteína os rna não-codificadores que possui um papel funcional regulatório dentro da célula e aí e o transcriptoma permite identificar região funcional do genoma para aquela célula ou tecido em análise então seja do todo

do genoma a gente vai saber qual região do genoma importante para aquele tecido que está sendo analisado para que o organismo certo eu quero em descanse toma permitir identificar todos os genes das isoformas que são importantes são a mostra um determinado momento é mas aí legal eu te entender o que é o cristão mas como estudar outro sintoma é bom existem diversas tecnologias e conhecimento de trânsito toma né a mais utilizada atualmente para o chamado rna-seq existem diversas técnicas que ainda são utilizadas mas são muito antigas que função anterior do rn a sec e as

estão totalmente em desuso caíram totalmente desuso então para aula como nem vou perder tempo com essas tecnologias anteriores que não são muito utilizados então vamos focar aula só na técnica de rns aqui então um protocolo de análise assim reduzido de uma renaseg que seria você tem uma mostra de interesse então pode ser amostra de diversos tecidos compro fígado cérebro músculo rim coração podem ser diferentes períodos embrionários por exemplo a eu quero saber quais genes são expressos ao longo desenvolvimento do camundongo que você pode pegar período embrionário distintos e fazer um inss like this é mais

extintos você pode fazer também a sec de células específicas por exemplo a eu tenho por isso eu tenho que o músculo então dentro do mussum do conjunto nos filete você tem as fibras musculares e tem por exemplo células de purkinje que vão passar informação elétrica para que o músculo contrai a um tem a sua contração então você pode fazer análise específica de cada tipo celular dentro de um tecido ou você quer trabalhar quero trabalhar com amostras de peixe de anfíbio entre outros animais é que pode ser usado então você tem uma moça interesse você vai

fazer estação dna que atualmente existem diversos protocolos específicos para tipos de tecido diferentes ou e protocolo já me utilizados para qualquer tipo de ser que você vai utilizar só faz extração de rna esse nl vai ser preparado para realização do protocolo de sequenciamento então basicamente você pega sua mostra dna você vai aplicar um conjunto de enzimas nela que vai transformar esse rna uma molécula descer dna o que a complementar o dinei por isso você então é um dna complementar rna e sirl vai ser quebrado em pequenos fragmentos onde esses pequenos fragmentos não se sequenciados pela

máquina de sequenciamento e a partir dessas pequenas sequências geradas você consegue resgatar identificar o padrão de expressão dentro de uma célula a partir da identificação de onde aquela pequena região veio então você tem essa pequena você conhece aqui que é chamado de grits que você tem uma pequena 20 consegue identificar que ela veio de uma região de um de um gene x e a partir disso você consegue ter um nível de expressão daquele gênero aquela mostra certo eu tô nem tribo das tecnologias conhecimento e se toma disponíveis atualmente eu vou citar mais ou menos algumas

que são mais utilizados e aqui nós temos a tecnologia cyclone testamento de segunda geração que é a empresa mais utilizada hoje é ilumina ela possui um baixíssimo custo é lá bem barato para conseguir fazer uma transferir toma com essa técnica né então ela praticamente ela vai fazer isso que eu comentei né ela pega o seu dna ela vai quebrar esse você ganhar em vários pequenos pedaços pequenos pedaços são preparados para ter conhecimento ea partir de vários lounges de amplificação você acaba tendo várias sequências para cada região sequenciada e depois dessas vezes você vai mapear contra

o seu gênio que do seu conjunto de dados e vai poder identificar a quantidade que cada gente a ser transferido a partir dessas vida uma piadas então pros essa técnica aqui no lado muito positivo dela é alta acurácia das vídeo gerados como elas eram muito pequenas então ela consegue manter uma curar são extremamente alta seja tem uma taxa de erro de menos do quiseram por cento as o fechados tô no caso você tem um genoma sequenciado ela tem uma análise de montagem simplificada e como ela é extremamente accuracy ela tem uma alta acurácia na nas

liderados ela te permite identificar algum e marcadores com muitas coisas pontuais em algum gênio estão sendo os pés naquela mostra que são os chamados de snippets então isso faz com que ela tem uma uma facilidade de aplicação clínica na área de clínica médica e ela tá sendo utilizada nessa área né porém um lado negativo essa técnica ela gera pequenos fragmentos de 150 a 300 nucleotídeos e sugere dificuldade a montagem trouxe toma de novo eu vou explicar um pouco mais para frente mas três toma de novo é quando você não tem o genoma de referência para

que ela espécie está trabalhando então isso dificulta muito a montagem eu trouxe tome por uma espécie que não tem um genoma e também ela dificulta quantificação de transferir similares ou seja por serem regiões muito pequenas e elas podem pode ter sido sequencial de uma região que é muito similar de um gene a e o gene b e é servida ela vai poder geral classificação errada dna dgnb por eles serem muito parecidos entre si certo uma outra técnica está crescendo muito o sequenciamento ea utilização de um dia você conhecimento terceira de terceira geração que é feito

pela limpeza do parque bill é chamada pacific biosciences então essa técnica interessante que ela faz você não precisa quebrar a sua molécula de cedinha em vários pequenos fragmentos você vai pegar essa molécula de ser dna você vai ligar um um adaptadorzinho nas regiões dela finais e vai gerar um com seus um dna circular ea partir desse dna circular você tem uma pequena uma enzima que vai fazer transcrição que vai replicar esse dna circular mas ele vai replicar se nem a circular não vários círculos mas ele vai replicando é uma pequena cobrinha e depois você parecer

conhecimento inteiro você tem várias vezes o mesmo se dna aplicado nessa longa fita e aí você consegue trabalhar em cima disso para poder gerar sequência consenso dessa molécula que foi gerada então lado muito positivo dessas técnicas e conhecimento terceira geração é que ela produz long beach que são verdes com mais do que 10 mil nucleotídeos oi e ele te permiti se pensar o trânsito inteiro seja você consegue identificar as reformas com alta curacha consegue identificar se está assistindo fusão e transcritos sem erros alguns sem algum e te dá uma constipação mais adequada do que de

shortinho vídeos por conta disso porém ainda assim essa técnica ela gera uma alta quantidade de erros cerca de dez porcento de erro nas vai sequenciadas então no caso tentar identificar alguns padrões dentro das sequências pelas quantidade de erros se isso acaba gerando isso como é o que eu coloquei aqui né gerar erros na detecção das regiões codificadoras em alguns outros padrões regulatórios que você vai tentar procurar nessa sequência que você conhecida então ainda assim tem uma dificuldade à vontade de interesse toma de novo também por conta dessa quantidade de erros gerados né e como a

quantidade de dados gerado é muito grande você precisa de um altíssimo poder computação para trabalhar com ela e outro lado negativo que eu não coloquei aqui na celestia esse é o alto custo extremamente caro para fazer um sintoma com essa técnica oi e aí agora uma nova técnica que surgiu nos últimos anos também que tá sendo muito comentado até no jornal nacional tava comentando ficha técnica por conta de sequenciamento do vírus do convide é o nó por era um pouco mais barato do que essa sequência do sequenciamento compaq bill mas ela ainda é mais caro

do que fazer com ilumina então ainda assim ela tem um alto custo então ela similarmente ao partido ela gera long hits e ela permite sequencial transfiro inteiro se ela fosse uma análise de montagem simplificada aparecido para que bill ainda assim tem o erro ao lado negativo se maior para que bloqueie era 10 por cento de erro ainda no bairro sequenciadas preciso de um alto poder computacional agora interessante dessa técnica é como é o sequenciamento dela né então vocês podem ver pela foto coloquei aqui em um aparelho bem pequenininho é um pouco maior do que um

pen drive e você pode ligar em qualquer notebook oi e aí você para poder gerar os dados então você tem ela chamar de manu por porque elas são pequenos poros ligados a proteínas né e essa proteína que ela o dna passa por essa proteína e ela consegue captar a diferença eletroquímica de cada base nucleotídica que tá passando por ela né então vai passar o trânsito por aqui ele vai identificado ele vai passar por uma quantidade de chips que tem lá e vai pegar o padrão do perfil de eletricidade de eletroquímico de cada base e a

partir disso e consegue ter a sequência né é por isso que a chama lá no corpo então apesar dela gerar em londres me dizer para mim te seguir transcrito inteiro ela ainda gera bastante erro nas bases referenciadas e ainda é muito gostosa para se fazer então no caso de países em desenvolvimento como o brasil por exemplo é complicado até ficar aplicando transe toma com técnicas como nó poliacril por exemplo bom então só no sistema não são das técnicas disponíveis hoje disponíveis hoje para realização trânsito toma a mais utilizada é realmente o ilumina não pode ver

não só por ela ter sido a primeira publicação transitando com ela ter sido muito anterior que as outras serve para 2007 né aquele o primeiro publicação por 2011 ea na unopar 2012 ela vem aumentando o número de publicações né mas ainda assim ilumina ganha de lavada das outras tecnologias né devido ao baixo custo que ela apresenta né então apesar da complicação da produzem short short witches assalto o baixo curso dela compensa esse lado então de vida isso eu vou comentar um pouco do método de análise da serrinha segue baseada para usados de ilumina que é

a técnica mais utilizada atualmente né então como analisar esses dados não se toma o bom é são gerados várias pequenas vídeos né então como tá aqui exemplificado cna7 vídeos então nós temos dois tipos de análise como eu já comentei né então nós podemos analisar os dados de uma espécie que tem hoje não sequenciado então se esquece se a espécie possui jam sequenciado mas pode fazer análise atravesse e como é chamada de referência e dizer baseado numa referência a gente mar peso vende no genoma de referência e a partir disso a gente consegue entender como nesse

exemplo aqui a gente ver que às vezes foram mapeadas no gene a b c d e f g sendo que o gnv olha ele teve uma maior quantidade de verde geradas nesse exemplo aqui né que interessante que as regiões que ficaram não são transcritas então elas não possuímos nenhuma no reconhecimento né ah e tem a outra método de análise o que é quando você faz uma análise do da de rené segue com a espécie que não possui e não se diferenciado que não tem seja é que sem não se sente uma referência essa análise a

chamada de novo e onde você gera os transcritos a partir da semente sequenciadas não vou entrar no mérito de como fazer essa análise e como os programas funciona para poder gerar as transcrições gs mak a mente as praticamente você usa as geradas às vezes muito parecidas elas vão montando consumir cercadinho uma do lado da outra e você consegue resgatar uma sequência de um transcrito e a partir desse transcrito montado você consegue repetir quantificar cada transcrito dentro da morte certa e aí tá bom então análise da drs aqui também e vão dar um exemplo aqui para

vocês agora imagine a gente tem um dado de renascer com a gente gerou 22 vezes então a gente fez um mapeamento do genoma com trabalhando com verde de um ano que tem hoje uma referência sequenciado de alta qualidade então a gente só precisa fazer mapeamento no genoma kant identifica onde essas vezes estão atendendo no genoma nesse exemplo aqui é partir disso a gente consegue fazer a quantificação desse genes então por exemplo lá genial tiveram 4 meses a expressão quatro meses uma piada do gene a duas vezes no gnb3 vídeos no sininho gnc-6 vírus no gnt

nenhum erro de higiene e três no f e 4g achar que lhe garante conseguir gerar uma tabela da quantificação de cada gene a nossa mostra interessante que a partir disso as notificações até a gente consegue fazer isso para várias amostras é partir disso comparar né quem nesse exemplo aqui olha com a gente pode notar o gene b na mostra um ele teve um pequeno expressão já na nossa dois três e não teve expressão nenhuma pra gente consegue comparando jennifer você teve uma alteração na expressão ou não né como o caso o gene aqui onde ele

teve o mesmo no meu digo isso apenas para cada amostra certo é isso a partir dessa comparação entre o nosso permite que a gente chegue na análise pressão diferencial o que é nada mais do que a comparação entre amostras estão sendo expressos né que a gente pode seguir um padrão de fazer uma análise de um tecido tratado por um tecido não tratado por exemplo um tecido foi tratado com o produto químico para um não tratado que seria o controle e aí a partir dessa comparação a gente consegue identificar esses produtos químicos vai alterar muito gente

está sendo expresso e quais genes estão sendo expresso diferencialmente o que ele pode acarretar no tecido em vivo né no caso dele ser aplicada então gente conseguiu fazer predições do que poderia acontecer através desse genes que estão tendo expressão diferencial né então outro tipo de análise pode ser feita também é comparar o tecido acrescido b por exemplo a vão comparar uns conhecidos expressos no fígado contra o músculo a partir disso a gente consegue liberar observar que vão ter alguns genes específicos e fígado que são expresso somente no fig os genes específicos do músculo que são

espécies no músculo contamente vai identificar um grupo de genes que tem nível de pressão parecido entre eles que provavelmente são genes que atuam em funções basais da célula né pra qualquer tipo de celular vai estar sendo expressa então também de poderia comprar até ser diferente para identificar assinaturas extinta de genes em diferentes tecidos tem poderá ser feita uma análise nem que tem pum e tempo dois por exemplo ao longo do desenvolvimento embrionário tinha comparar o período o desenvolvimento um e para o desenvolvimento de juvenil do camundongo ver que tá diferente expressa entre dois períodos você

pode ser feito também atrás análise pressão diferencial então o resultado das análises pressão diferencial além de identificar assinaturas específicas para cada facada análise para cada tecido para cada tratamento que está sendo aplicado permite inferir quais eles podem ser associados a esse fenômeno isso pode te permite girar uma rede de interação gênica ou seja tentar entender como genes que estão mais peço menos peço dentro desse fenômeno que está estudando como elas estão interagindo entre si ea partir das interações permitidas identificar alguns meses potencial para realização de estudos funcionais para quais genes podemos ser alvos de fármacos

no caso de uma comparação entre doenças a gente percebeu que o gnx aqui tá o esperado e sabes que tem um medicamento que regula a expressão desse gene x não poderia ser um faro poder ser utilizado por uma doença por exemplo e além disso permite de desenvolvimento de novos fármacos através da identificação de genes que estão relacionados com doenças ou com algum fenótipo observado você pode desenvolver nossas fármacos a partir disso entre outras aplicações bom então aqui eu vou passar um açaí para vocês com seu estudo de caso aqui de uma análise de idade renaseg

para vocês só para fazer uma revisão que a gente viu até agora que eu tô entendendo um pouco mais então e vamos supor que nós somos pesquisadores estão desenvolvendo um produto para pele opa e atende esse produto para pele aqui e a gente quer descobrir se esse produto é seguro um dos pés que a gente pode fazer o que aplicar esse produto em células de humano células da pele de um humano que é chamado uma análise in vitro é para gente ver se a presença do nosso produto que a gente se envolveu certo algum gênio

vai sofrer alteração na expressão se tiver em genes que pressão diferencial quais são esses genes então como a gente deveria fazer para fazer essas rna-seq até imagina aqui em azul nós temos as células de pele de um humano não tratados que são as chamadas controle e nós temos aqui em verde porque o nosso produto tem a cor verde então deixa as células um pouco verdinhos né então nós temos as células de humanos tratados com o nosso produto que a gente quer ver se tem expressão diferencial então a gente aplicou o produto nas células tratada e

fez na na cnc que tanto dos da nossa nossa controle quando nós somos tratada então a partir da n a sec ainda bem que a gente já trabalhando com a morte humana que tem um genoma referência para utilizar então a gente vai fazer o mapeamento ea partir do mapeamento a gente vai conseguir a entender né porque uma para mim também gerar quantificação essa modificação vai gerar o nível de expressão de cada gene dentro de cada caso é no caso do controle e do tratado então essa quantificação e separada para cada amostra permite que a gente

faça a comparação direta entre as amostras e é que no caso como a gente pode ver olha o gene a o nosso produto opa legal pronto quem desenvolveu não deu alteração nenhuma no gene a e o gene b olha só também não ficou no mesmo nível de expressão dos genes e também o mesmo expressão e hoje ng também mas olha só opa parece que o o gene de gnf tiver alteração na expressão no caso o gene de olha só teve uma diminuição de 20 vezes no nível de expressão dele enquanto que o gnf teve um

aumento de 8x 1 nível de expressão olha só mas aí será que esse genes alterados e se poderiam causar algum mal para seus que a gente está aplicando se a questão gênesis críticos que possam as geral um efeito maléfico do nosso produto frente notou aqui que o gene de geneve possui alteração na expressão todos são potenciais alvos de estudos funcionais ou seja se já tiver algum dado à literatura que mostra a função desse genes para célula da pele que poderia associar com esses estudos e poder falar mal nosso produto provavelmente vai causar isso mas no

caso não tecido nenhum estudo ainda sido feito com esse genes e são possíveis alvos funcionais que a gente poderia aplicar um estudo e tentar entender o que esse gene e nas células da pele vocês podem causar algum dano ou não bom então um tacna compreender a função desse gênio já indicasse o nosso produto ele é seguro se ele pode ser testada em humanos o peixe e sonhos conseguir mostrar bem para vocês como é uma análise e nessa aqui em cima né eu acho uma maneira bem simplista porque é bem mais complexo do que eu mostrei

aqui para vocês né mas é uma maneira simplista acho que deu para ter uma ideia geral né então agora vou mostrar para vocês aqui um pouco do trânsito tomem suas aplicações como ele tem sido aplicada aí na literatura que eu vou dar um exemplo de alguns artigos publicados e alguns projetos que ainda estão desenvolvimento mas que geram algumas análises interessantes no trânsito toma né bom então uma das atividades transitórias chapa já notou bem é aplicação de análise diferencial né então é só nesse estudo aqui publicado bem interessante eles analisaram vários tipos de câncer que eles

pegaram tecido de câncer de vários tipos né de pulmão de ovário de mama do idioma e fizeram o transportou umas desse tipo celulares desse tipo de câncer e aí fizeram a identificação para saber se eles achavam assinaturas distintas de alguns genes dentro de cada tipo de câncer o se todos os cânceres iam ter um mesmo tipo de é de pressão diferencial do mesmo gênero então interessante a que eles notaram que vários tipos de câncer tem assinatura distinta de alguns genes ou seja vários genes estão tem uma expressão diferencial para cada tipo de câncer analisado mostrando

que existe uma assinatura que eles podem estar auxiliando no progresso um uma diminuição do progresso desse tipo de câncer foram analisados né aqui também interessante que na análise que eles fizeram em mieloma e se consiga identificar através da rede interação gênica desse genes com o aumento e diminuição da expressão uma rede específica de alguns genes e como eles podem estar interagindo para poder para estar causando esse câncer de mieloma né então seja a partir de uma análise dessa expressão referencial eu uma geração de uma rede de interação prontinho implicância esses todo esse genes aqui que

estão anotados aqui maior que do lado são possíveis genes que podem ser alvos terapêuticos para o câncer e por exemplo tão fármacos que agem em cima desse genes podem ser utilizados e podem auxiliar no tratamento do câncer de mieloma por exemplo a outra aplicação legal aqui que foi uma revisão que foi publicada que é a partir de um com genômica né que é você entender a expressão de alguns genes é indicada câncer te permite chegar numa metodologia terapêutica né então por exemplo genes que aumentam a expressão como tá que ganha expressão né que tiveram um

aumento na expressão a um possível ao para terapia e você entender como ele está o expresso o que fez com que aumentasse a expressão dentro dessa tipo de câncer né foi uma mutação pontual foi algum outro gênio que tá sendo mais ativado que tá tirando mais ainda expressão dele é interação que ele tem produto gente está fazendo que ele tem uma expressão aumentada isso faz com que você possa a entender um pouco mais aquele diferencial fazer algumas análises funcionais em vidro por exemplo ou em vivo utilizando camundongos e chegar em alguma metodologia terapêutica para aquele

gênio questão e a mesma coisa que a gente que perdem expressão né então se ele perdeu a expressão no tipo de câncer será que na verdade aquele gene que teve a suspensão de minas dele era importante para se ela continuar não sendo cancerígenas será que ele era um gênio chave e a partir disso eu poderia por exemplo fazer uma proteína sintética parecido com aquele gente está em falta e aplicar para aquele tecido por dentro e talvez isso ajudaria no tratamento de câncer né então há mais trânsito tomem câncer poderia auxiliar muito né o outro tipo

de análise interessante a sendo que é aplicado estão também eu tentar entender assinatura do gênesis expressos e as usou formas entre vários tipos celulares como por exemplo esse trabalho que foi publicado recentemente em que ele analisou o padrão de expressão entre os vários tipos de neurônios que a gente tem o cérebro né então ele pegou quatro tipos que tem né e isso do nível de expressão e as isoformas do que estava sendo transferido nessas nesse tipo de tecidos né então eles identificaram que algumas reformas são específicas os subtipos de neurônios ou seja existe uma isoforma

x1 que específica desse tipo de neurônio vip aqui e nenhum outro de neurônio tem essa mesma isso forma seja porque ele provavelmente é omisso forma o que causa alguma característica molecular importante pra esse tipo de neurônio vip né e quem interessante que esse genes podem ser possíveis alvos de tratamento para doenças mentais porque esse senhor antes quando estudava neste estudo são são subtipos de neurônios que não relacionado com algumas desenho doença psíquicas certo então olha só uma análise de expressão diferencial se pode identificar com a higiene são cruciais a cada tipo de neurônio e podem

ter auxiliar na resolução aí ou no prognóstico aí de dedões de pessoas quando alguma doença psíquica uma outra aplicação é de trânsito toma que tá sendo muito utilizado também na utilização da estão a presidente ficar marcadores moleculares em fluidos corpóreos ou seja o trânsito toma ele permite associar o perfil de expressão de genes presentes nos fluidos corpóreos da específicas que são escritos por pode pode ser sangue urina lágrima então todas esse fluidos corpóreos eles têm rna o junto deles então você talvez identificar por exemplo amostra de sangue de pacientes com câncer de pele pode ser

notado que diferente qualquer outro tipo de câncer a gente tem uma outra expressão do gene um dois e três e uma baixa expressão do gene 4dn 5 ou seja sem você fazer análise nenhuma pessoa apenas e tirar o sangue fazer outra se tomei uma pessoa se ela tiver uma expressão malta expressão do gene um dois e três cima baixo que são gn45 pode ser indicativo de que ela tá com câncer de pele é isso faz com que a pessoa vai atrás de um outro tipo de diagnóstico para poder confirmar ou então ti tá já começaram

um tratamento né é a mesma coisa para eu coloquei dizendo aqui pacientes com câncer de próstata paciência que os diferencia cardíaca o paciente com alzheimer que posso contar com o estágio mais inicial avançar de alzheimer você pode conseguir a gente ficar isso através de uma análise e uma moça de sangue fazendo trânsito toma então não só de sangue contra impactos e de urina no caso de paciência o câncer de próstata esse trabalho o recentemente construiu alguns genes possui uma expressão diferencial e fazer uma análise e urina por exemplo e isso pode facilitar muito análise e

facilitar pessoas aí que por exemplo não gosto de de não tem vontade de fazer uma análise convencional poderia fazer uma análise de tanto toma da urina inicialmente e no caso de ter uma expressão dessa poderia para outro tipo de diagnóstico certo o rappi multiplicação aí tem sido muito comentada aí que a gente está vendo no jornais todos os dias aí é questão do convite né que tá aumentado muito o número de casos no mundo todo então para quem não sabe o sars-cov dois que é o vírus da corrigir né ele possui o seu genoma rna

então ele não é um vírus que ter o genoma rna então para poder sequenciar o genoma desse vírus só utilizando até que a distância que toma né agora só que interessante março m20p sequenciadas duas amostras dois de número de amostras brasileiras né e foi notado que essas duas amostras vieram de pessoas tiver na relação com alguém que tava na itália o que já tinha acabado de chegar da itália ou tiveram relação com alguém que tinha viajado para itália e voltou né então seja conseguiu permitiu traçar rota de entrada do que o vídeo aqui no brasil

né ó e além disso também permitiu traçar rota de distribuição do cabide do mundo e além disse entender como esse vírus já me seguir está evoluindo no mundo né interessante que todas as cenas e potenciais fármacos estão sendo testados contra o vídeo eles todos estão sendo testados a partir do conhecimento do genoma do vírus só foi possível através da técnica do sequenciamento de trânsito toma é bom agora falando um pouco dos projetos que eu que está em desenvolvimento aqui que eu faço parte e tal utilizou tenso toma para identificar toxinas enganou de veneno de serpente

né então ele é só tem um trabalho aqui que está em finalização no momento que foi identificada a composição diferencial de toxinas na glândula de veneno entre juvenis e adultos de voto que jaracuçu que é uma espécie jararaca olha só que interessante foi notado de juvenis aqui tá o tamanho né serpente né então quanto maior a serpente foi notado que foi diminuindo a quantidade é uma toxina chamada sb mp3 que a metaloproteinas tipo três vou diminuindo tipo de expressão dessa toxina e aumentando o nível de expressão do toxina fosfolipase dois toque a metaloproteínases três tá

em azul o azul escuro em amarelinho é a fosfolipase a2 então tá vendo conforme ele vai aumentando o tamanho vai diminuindo metaloproteinase tipo 3c aumentando a fosfolipase e quem interessante é que na hora de fazer uma análise da atividade hemorrágica e meu tóxica desse veneno foi notado que vendo juvenis possuem um padrão de atividade mais hemorrágico encontro de adulto possui um padrão mais 1000 tóxico ou seja será que esse padrão de veneno sendo diferencial ao longo do desenvolvimento e dessa cobra tem a ver com o tipo de empresas da pregação dele e outra coisa dependendo

do tamanho do indivíduo que pegou a pessoa o tipo de sorante eu finjo que tem que ser aplicado tem que ser diferente né porque não adianta você aplicar um soro antiofídico que é para hemorrágico sendo que o adulto tem um padrão meu tóxico né então até mesmo no caso clinico para poder tentar salvar alguém da sua filha de uma picada de uma volta o que jaracuçu não precisa saber qual o padrão de veneno daquela serpente para poder aplicar o melhor soro antiofídico e no outro análise realizado também que tem finalização foi da bota opção alternados

que é conhecida como urutu cruzeiro é uma espécie uma dieta generalista né praticamente o que ela encontra que ela consegue comer ela come ela não é especializada ninguém interessante aqui olha área de ocorrência dela aqui no brasil é a sarinha que tá em verde aqui então acontece desde aqui do centro-oeste até o sul do brasil né então nós pegamos uma mostra do centro-oeste uma mostra do sul do brasil nós temos que elas possuem perfil diferenciada na área só a do centro-oeste ela possui como ser uma toxina mais expressa fosfolipase dois e menos metaloproteinase enquanto amostra

do sul e ela possui quase não possui fosfolipase e possui bastante metaloproteinases três quando comparado a moça do centro-oeste então seja provavelmente elas possuem padrão de atividade diferenciado que a gente nem texto mas será provavelmente esse tipo de padrão dela tá relaxado o tipo de empresa que ela encontra na região centro-oeste tipo de empresa que ela encontra a região sul e mais uma vez aqui mostra aqui provavelmente ir ser quem sofreu uma picada de urutu cruzeiro no centro-oeste vai ter que ser tratado um soro antiofídico diferente de uma pessoa que foi picada por uma urutu

cruzeiro no sul do brasil então seja soro antiofídico o mesmo soro antiofídico outro cruzeiro com certeza não vai funcionar dependendo da região geográfica o que é serpente veio um e mostra análise muito interessante grupo que o meu grupo de análise já publicou e que vem trabalhando e na identificação de nós toxinas e serpentes ainda não estudados né então por exemplo foi identificado uma nova toxina incollub diz que são esses coloridos são serpentes que não possuem aqueles dentes igual à da jararaca né para inocular o veneno então expulsando tipo de dentição normal sim e é sim

um dente específico para inocular veneno então vendendo elas fica na saliva delas só interessante ao estudar uma espécie de clube foi identificado o e-mail penha diversas espécies de de colubrideos e essa nova toxina ainda não se sabe a função dela né mas olha só as nossas toxinas ela podem ser pode ter alguma função aí na área biomédica com por exemplo tem uma toxina de jararaca que era utilizada para controle de pressão arterial e ela veio do veneno da cobra da jararaca tão ou seja nesse caso aqui estudar a função dessa nova toxina identificada que é

uma matrix metalloproteinase se ela pode ser que ela tem uma função biomédica aí ou seja identificar novas toxinas pode ser muito útil bom para clarear biomédica tá bom vamos deixar com mensagem final aqui que o trânsito uma ferramenta altamente utilizado para identificação de gente usou formas análise pressão diferencial permite identificar potenciais alvos para estudos funcionais e ela pode levar associações a doenças e condições específicas identificar transferidos específicos em determinadas condições tecidos além de identificar rede de interação gênica na mostra e ela permite conhecer a gema de vírus que possui o material genético e o que

é o cilindro estudo para identificar fármacos para esses vírus e permitir essa evolução do vírus ao longo do tempo além de identificar marcadores associados a doenças específicas e a sinta-se tomar ele pode ser considerado atualmente a técnica mais utilizada na pesquisa e que permite trazer diversos ensaios para diversar vezes tudo desde áreas estuda a biomedicina com mais estudos funcionais que querem tem da atender até a evolução do padrão de expressão de genes enganou de veneno por exemplo bom espero que vocês tenham gostado da aula que até ser bastante informativa preciso tiverem alguma dúvida ou quiser

mais alguma informação no meio tá aqui embaixo pelo nativo arroba gmail.com sai obrigado pela atenção