Cromatografia de troca iônica

a cromatografia de troca iônica é uma técnica de separação de substâncias Em uma mistura que leva em consideração a diferença nas cargas de moléculas eletricamente carregadas essa separação ocorre por meio da força de atração ou repulsão exercida pelas cargas elétricas das moléculas de uma substância e sua afinidade com a resina em uma coluna durante a passagem da mistura de interesse pelo tubo cilíndrico a diferença de cargas entre entre elas permite a separação de moléculas que seriam difíceis de serem separadas por outras técnicas já que a carga elétrica da molécula de interesse pode ser manipulada através

de alterações no PH do tampão essa técnica cromatográfica é comummente utilizada na separação de proteínas peptídeos e aminoácidos está envolvida em diversos processos industriais como na dosagem e isolamento de componentes medicinais e nos processos de purificação de an corpos para a escolha da cromatografia de troca iônica leva-se em consideração o mecanismo de separação e as características da fase móvel e da fase estacionária em uma coluna a fase móvel aqui é representada pela passagem da mistura de interesse e a fase estacionária é representada pela resina na cromatografia de troca iônica a resina é formada por polímeros

essa resina pode ser carregada positivamente ou negativamente ou seja na cromatografia de troca aniônica utiliza-se a resina com moléculas com carga positiva e afinidade para moléculas com cargas negativas por sua vez quando a cromatografia é de troca catiônica a resina utilizada possui moléculas com carga negativa e afinidade para moléculas de carga positiva de maneira geral o primeiro passo para realização da cromatografia de troca iônica é a equilibração da coluna para isso é preciso passar por ela uma solução tampão de Equilíbrio que tem a função de homogeneizar as cargas elétricas da resina e prepará-la para receber

a substância de interesse essa solução tampão tem carga elétrica fraca e oposta à da resina evitando que ocorra variação expressiva no PH durante a passagem da mistura devemos lembrar que sistemas aquosos tamponados tendem a resistir a mudanças de PH quando pequenas quantidades de ácido h+ ou base Oh menos são adicionadas a escolha do tampão ideal para equilibrar a coluna é feita a partir do conhecimento do ponto isoelétrico das substâncias que se quer separar que é o ponto onde haverá neutralidade entre cargas positivas e negativas dos agrupamentos Químicos Por exemplo quando as moléculas de interesse apresentam

carga negativa ao se utilizar um tampão com ph maior que seu ponto isoelétrico deve-se escolher uma resina de troca aniônica ou seja carregada positivamente para que essas moléculas Fiquem retidas na coluna já quando as moléculas de interesse apresentam carga positiva ao se utilizar um tampão com ph mais baixo que seu ponto isoelétrico uma resina de troca catiônica carregada negativamente deverá ser escolhida para que essas moléculas sejam capturadas vejamos a agora um exemplo de troca aniônica Relembrando nessa troca a resina na coluna tem carga positiva com afinidade para moléculas de carga negativa o processo inicia com

a equilibração da coluna ou seja com a passagem da solução tampão de equilíbrio em seguida a mistura de interesse para ser separada diluída em tampão de Equilíbrio é aplicada na coluna para separação as moléculas ionizadas com mais afinidade à resina podem ficar retidas ou demorar um tempo maior ao passar pela coluna essa afinidade contribui para que as diferentes moléculas se separem ao percorrer a coluna após a passagem da mistura de interesse e lavagem com o tampão de Equilíbrio a coluna é preenchida gradativamente com a solução tampão de eluição que lava a coluna e elui as

moléculas que ficaram ligadas à coluna conforme sua menor ou maior afinidade pela resina Depois dessa eluição uma solução de limpeza e conservação são adicionadas na coluna para avaliar e quantificar as amostras que estão sendo eluído cromatográfica é feita a leitura da absorção Luminosa também chamada de absorbância das amostras que saem por meio da espectrometria assim são obtidas informações que permitem ao analista a sua identificação e quantificação nesse tipo de espectrofotometria ocorre a incidência de luz no espectro do ultravioleta na amostra ada cada molécula da amostra absorve e reflete um sinal luminoso que é captado no

espectrofotômetro por um detector essa leitura auxilia o analista na identificação dos componentes da amostra de interesse e na geração do cromatograma o cromatograma é o gráfico gerado durante o processo e representa o que foi captado pelo detector esse registro gráfico possibilita identificar o volume e o tempo de desprendimento das substâncias eluído a entrada até sua saída pela coluna permitindo A análise quantitativa e qualitativa dos seus componentes cada Pico do cromatograma está relacionado a um ou mais componentes identificados nele é possível observar três eixos em geral no eixo X encontra-se o tempo no eixo Y à

esquerda absorbância e à direita a concentração de de sal vejamos os dados disponíveis para a leitura de um cromatograma tempo de retenção o tempo de retenção corresponde ao tempo transcorrido entre a injeção da amostra e a sua chegada ao detector largura da base do pico a largura da base do pico expressa a eficiência da coluna resolução entre outros aspectos quanto mais estreita é a base do pico mais eficiente é a separação resolução a resolução descreve a habilidade de uma coluna em separar os picos de interesse Considerando o tempo de retenção e os formatos dos Picos

gerados sendo assim a partir dessa leitura é possível identificar no processo de cromatografia avaliando os Picos gerados quando ocorre má resolução e má eficiência boa resolução e má eficiência boa resolução e boa eficiência em resumo a técnica da Raia de troca iônica pode ser dividida em três etapas etapa um onde acontecem as trocas iônicas entre a coluna e as moléculas da mistura etapa do onde ocorre a leitura da mistura por espectrofotometria e etapa 3 onde é gerado o cromatograma para saber mais sobre este e outros temas relacionados se inscreva no nosso canal e acompanhe os

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