ELETROFORESE DE PROTEÍNAS - DEFINIÇÃO E PROCEDIMENTO

oi boa noite turma tudo bem aula passada a gente viu sobre as proteínas séricas o que elas são né e hoje nós vamos ver um exame para detectar essas proteínas que a eletroforese eletroforese ela não vai ser só eu também vai ser usado não só proteínas mas também como para dna e rna a gente pode definir ela como um processo para né fazer a migração de partículas tá que vão ter ali né a sua separação através da influência do campo elétrico então as cargas positivas e cargas negativas vão se separar sob condições de corrente elétrica

constante e esse deslocamento vai ser resultante de uma carga efetiva da molaridade do tampão e da resistência do meio usado ali como suporte então a gente vai aprender cada procedimento né e vai entender um pouquinho mais sobre isso então nós vamos ver o que que a mobilidade eletroforética ela vai ser a personal essa carga da partícula e vai ser inversamente proporcional à viscosidade do meio cá que a gente vai colocar essa mostra isso vai gerar um potencial elétrico e vai promover o que a migração dessas proteínas em lados opostos tá em lá de acordo com

o lado positivo lá lado negativo dessas máquinas moléculas tá a gente vai ver elas migrando tá de acordo com essa corrente elétrica que a gente vai colocar tá nessa substância esses já vão aprender como que todo o sentimento mas isso tá vai ser uma forma da gente separar essas macromoléculas positivas das negativas de acordo com a carga elétrica que a gente vai promover e para separar essas macromoléculas então é pensam na centrifugação por exemplo quando a gente quer separar o sangue soro plasma né a gente usa o que usa as entre a mesma coisa né

quando a gente quer mas porque nesse caso quando a gente trata sobre essas proteínas séricas a gente não consegue fazer é essa separação e simplifica porque porque elas são constituídos de macromoléculas positivas e negativas e isso tá no momento da simplificação seria impossível tá de separar então por isso a gente precisa o método da eletroforese tá para separar essas cargas então vamos imaginar aqui a seguinte situação né primeiro esse quadradinho aqui né aqui vai estar né a minha cuba de eletroforese a gente vai usar alguns polímeros tá para adição ali da substância que a gente

vai querer a gente vai ter ali a carga positiva carga negativa eu vou acrescentar nessa minha mostra né nesses a gente seja vão aprender tem um vídeo ali certinho vou que ele senta na minha mostra né esses passar a e tá a gente vai ver o que que quando a gente induz a corrente elétrica a gente vai vir macromoléculas positivas e negativas sendo separadas umas das outras então as vão correr elas estavam né aqui centralmente a hora que eu dei a carga né elétrica nesse campo que que eu vou ver eu vou ver essas macromoléculas

sim dissipando porém o que que eu vou analisar quando a macromolécula se ligar tá chegar próxima a região positiva tá quê que eu vou realizar eu vou ver uma máquina molécula negativa porque as duas tá se atrai a positivo porque que não vem para cá porque ela se repelem então esse tá esse ato de utilizar esse campo elétrico da justamente para isso para moléculas né de campo negativo diferente se aproximarem uns dos outros então no campo e eu vou ver máquina moléculas de campo negativo e no campo negativo eu vou ver mato do moléculas de

campo positivo então vamos imaginar uma outra tá situação ali eu tava querendo separar o que moléculas com cargas diferentes nesse caso aqui eu vou querer analisar o que uma máquina molécula de mesma carga positiva com mesma densidade porém ela está fragmentada e possui peso molecular diferente então como é que eu vou saber de cada né cada macro mulher quando a gente hindus tá essa essa substância aqui né substância x vamos imaginar aí é contar a gente vai ter ali diversos pesos eu vou ter uma com 100 200 300 400 tudo aqui na mesma tá elas

tão tudo uri fragmentadas entre si e eu quero que ela se separem eu quero identificar qual que tá com sem qual que tá com 200 300 e é isso que esse exame vai fazer para mim vai separar tá quais essas quais são né as macromoléculas de acordo com seu peso mas professor então como é que eu vou saber foi colocado então uma corrente elétrica nessa substância e a gente viu o seguinte então foi colocado ali né ela correu então ela saiu do campinho e ela correu e ela se separaram tá eu tinha ali no caso

quatro e ela se separaram então como é que eu vou saber qual nota da molécula é de peso né de peso molecular d100 d200 d300 de 400 te acordo tá conforme ela né ela for correr então a gente viu que aqui umas correram menos pois aqui era a base né que elas estavam tão correu menos correr um pouquinho mais correr um pouquinho mais e correu né bem mais então como eu saber qual é o peso dessas moléculas e quanto menor o peso molecular maior vai ser a velocidade então ela vai correr muito mais rápido então

eu vou saber o que que é essa que chegou aqui primeiro é de peso sem a segunda de peso 200 a terceira de peso 300 e a última de peso 400 então a eletroforese além de me ajudar a separar macromoléculas positivas e negativas ela também me ajuda nesse procedimento quando eu voltei ali por exemplo alguma substância fragmentada com pesos moleculares diferentes então vai me ajudar a separar né e a identificar essas máquina moléculas então como eu disse né é o quê que é a eletroforese e vai identificar vai identificar proteínas com cargas diferentes e proteínas

com cargas iguais porém com peso molecular diferentes agora o que que eu vou usar tá para a gente ter em toda essa corrente elétrica acontecendo a gente vai precisar de alguns reagentes nessa substância tá a gente vai precisar de uma solução tampão ionizada a gente poderia usar água poderia tá se já vão ver bem certinho isso em vídeo ali a gente poderia usar água poderia mas a corrente elétrica que a gente que ocasionaria ali não seria tão eficaz como uma solução tampão ionizada por quê porque é a água ela não conduz eletricidade tão bem como

a ionizada assim ela vai facilitar o serviço e a gente vai ter uma certeza uma garantia de que aquilo que correu tá foi de forma eficaz no tempo certo de forma correta sem interferência tá a gente também vai ter para algumas substâncias gente vai precisar o uso de corantes para conseguir marcar tá essas proteínas e o uso de polímeros tá o que são polímeros e nós vamos ver duas formas específicas de polímeros o gel de agarose que vai ser para separação de moléculas maiores então quando for maior daquela molécula né a gente vai poder usar

o gel de agarose no caso a gente vai usar isso no caso de dna e rna a gente vai ter o gel de poliacrilamida que esse gel ele vai ser se pra separação de moléculas menores aí a gente pode usar no caso de moléculas menores de dna rna e vai ser usado em específico quando a gente tiver tratando de proteínas que são moléculas menores então a gente vai precisar desse gel para a gente fazer né essa análise de proteínas então para vocês entenderem porque né da gente usar um poder maior de outro tá menores moléculas

o gel de agarose depois que ele é dissolvido aquecido né que ele se dissolve e ele se solid fica aí e aqui ele formando uma malha com espaçamentos bem maiores né então no momento dessas moléculas passarem entre essas teias tá do gel de agarose elas vão ter facilidade então vai ser o suficiente para elas se por exemplo uma célula grande tentar passar nessa nesses buraquinhos aqui no gel de poliacrilamida a gente vai ver o que que elas não passarem eles não conseguiram correr certo ou seja para gente não interia ali o resultado de um exame

porque ela não passaria e quando a gente for ver tá fazer um exame com moléculas menores a gente vai usar essa esse gel aqui porque se usar um gel muito grande o que que acontece vai dar interferência no resultado pode ser que ela não corre de forma correta que ela precisa ter os espaçamentos corretos para a gente ver o resultado correto então a gente sabe trabalhou com moléculas maiores gel de agarose trabalhou com moléculas menores gel depois tá certo outro fator também sobre os polímeros a gente vai ver o que quanto maior a concentração dos

polímeros mais estreitas serão as malhas então eu tô usando um dh dose tá para uma célula grande eu vou provavelmente vou usar ali um por cento mas se eu for trabalhar com moléculas e sejam menores mas não são menores a ponto de usar o gel de poliacrilamida tá eu vou usar então esse gel de agarose para dizer a sapato por cento que vai ser o suficiente ali para minha molécula então de acordo com o que eu vou usando tá essa porcentagem de 14 por cento dois por cento eu vou adequando conforme o que eu for

usar em relação minha molécula no caso da do gel de poliacrilamida a gente vai tá vendo ali dez porcento dos por cento de acordo com o tamanho da minha molécula que eu quero trabalhar então a gente vai né se tem que estudar um pouco para ver que molécula que você tá usando é uma proteína tal então eu sei que a estrutura dela é um pouco menor então vou trabalhar com ele né então é quanto maior a concentração do polímero mais estreita tá vai ser essas malas ou seja menor a passagem vai ser mais difícil mais

dificultada então se você colocar uma molécula maior ela não vai conseguir ter o resultado correto então pessoal que você aqui para vocês um videozinho tá aqui vem desde a montagem tá da da dos polímeros de como é que é feito adição então aqui ela vai tá fazendo em agarose então vai pegar as bandejas vai encaixar as borrachas tal nas laterais e essa bandeja é especificamente para a gente ter montagem dessa agarose né desse polímero ali nessa bandeja que é o que a gente vai usar depois para correr vai despejar os o gel né que a

gente vai usar ali no caso tá usando agarose não sei se conseguir enxergar mas tá garoze um por cento ali e vai encaixar os pentes tá e vai aguardar este gel se solidificar porque que ela coloca esses dentes aqui é esse nesse lugar desses pente zinhos que vai ficar os buraquinhos como se fosse aqueles quadradinhos que eu não sei ali para vocês agora né é para a gente colocar substância então a gente coloca esse pezinho só para formar o buraquinho tá bom então já solidificou ela vai tirar as borrachas da lateral cuidadosamente para não interferir

ali vai tirar esse esse pente e agora a gente vai colocar na cuba que a gente vai ter ali para colocar carga a gente vai despejar o tampão tá ionizado a essa solução que dá tá a potencialização para correr a corrente elétrica vai colocar então aquela bandeja de gel né que tá copolímero ali a e agora nos buraquinhos que a gente formou vai aplicar a substância que a gente vai analisar aqueles pocinhos onde a gente fez com ajuda do pente e vai conectar a tuba fonte de alimentação de energia e vai ajustar voltagem correta é

a corrente elétrica e o tempo da corrida de acordo com a sua molécula e aqui gente ela tá trabalhando com uma molécula de dna tá com 10 minutos a gente já vai ver essa substância se separando se dissipando tá então ela já correu com 20 minutos tá que é o que ela precisava aqui para analisar a gente já viu essa corrida tá já conseguiu identificar ela se né andando aí se separando então agora é a hora de fazer a retirada para a gente fazer a revelação então do que que foi separado em velozes aqui nesse

caso o laboratório já tem ali né é as máquinas certas né para fazer essa visualização bom então aqui a gente consegue né identificar ali ó analista vai analisar e vai identificar a separação né dessa molécula bom então é isso pessoal essa foi na sala de hoje espero que vocês tenham entendido qualquer dúvida que vocês tenham em relação ao procedimento aí das proteínas deixa aqui nos comentários foi estar aqui com vocês até o final dessa aula pra gente estar comentando né tirando as dúvidas também entraremos na próxima aula aí em parasitologia espero vocês lá tenha um

bom restante de aula e até breve