Unknown

fala pessoal sejam bem-vindos ao seu canal do chroma eu espero que a gente esteja ao vivo aqui funcionando já tenho aqui 17 pessoas no nosso canal Vocês já estão escutando eh vou começar aqui pessoal até já pedindo a ajuda de vocês n todos vocês que que estão de fato conseguindo me ver conseguindo me escutar envie um envie um alô aqui no no chat boa Rodrigo Maravilha Obrigado pelo suporte já tô vendo aqui o seu seu comentário mais alguém mais alguém tá me escutando vamos lá galera sejam bem-vindos aqui ao seu canal do chroma cles a

sua aula de hplc e como ele funciona de fato olha só que maravilha obrigado pelo feedback aí Michele o Ivo o Orlando também Olá pessoal boa noite sejam bem-vindos aqui ao nosso canal nós vamos falar muito sobre cromatografia hoje especificamente sobre cromatografia líquida mas aqui no nosso canal também vocês vão ter bastante bastante conteúdo sobre cromatografia gasosa então vocês são eh bem-vindos à casa de vocês então sintam-se à vontade aqui tô vendo que a Gisele ali já mandou também que tá tudo ok Aqui deixa eu perguntar uma coisa para vocês o áudio Tá ok eh

vocês estão escutando bem aí Eu imagino que que tá tudo certo Qualquer coisa vocês me avisem tá ao longo desse bate-papo aqui das próximas aulas também vou pedir sempre o suporte de vocês aqui pra gente ter sucesso combinado Maravilha perfeito galera olha só vou embasando aqui né e começando essa aula eh Inicial né A primeira aula aqui do nosso canal sobre cromatografia a gente já teve aulas sobre cromatografia em outra oportunidade no ano passado e esse é um projeto novo aqui do cromac é o projeto de 2024 do qual a gente vai ter algumas jornadas

aqui tanto a jornada do hplc quanto a jornada do CG o que que eu quero dizer com isso pessoal eu e o Bruno Carvalho que é o especialista de cromatografia os e cromatografia líquida aqui do nosso time a gente bolou algumas aulas para passar para vocês tá E é inevitável a gente começar do básico né então esse canal aqui vai ser um canal de muita troca eu vou começar por cromatografia líquida o falar sobre hplc o processo cromatográfico e Como o hplc funciona mas já digo para vocês que por exemplo a próxima aula de cromatografia

a gente vai mergulhar vai aprofundar em colunas cromatográficas Então as duas próximas aulas é só sobre coluna cromatográfica pra gente saber no detalhinhos cuidados de coluna cromatográfica que a gente vai ter Beleza eh deixa eu pedir uma uma informação aqui para vocês pessoal show Magon Valeu galera obrigado pelo pelo suporte eh eu assim como da outra vez né a gente batendo um papo aqui conversando com todos todos vocês né hoje tem uma galera aqui assistindo já tá E e a gente trocava algumas informações Além de vocês darem o suporte até a Leila falou aqui que

o áudio tá ok obrigado Leila pelo feedback a gente gosta de trocar algumas informações e mapear de onde vocês estão assistindo essa aula então rapidamente aqui antes de eu passar todos os recadinhos aqui né dessa aula e os objetivos pra gente dar o pontapé mesmo no na aula eu queria pedir para vocês Vocês conseguem me passar de onde vocês estão escutando eh a gente de que lugar do país você tá eh de qual instituição Você é ou qual empresa é super legal pra gente tentar entender aqui quais são os nossos ouvintes e quem tá fazendo

parte aqui da nossa comunidade Então quem puder colocar olha só a Carla já colocou aqui Brasília nós temos o Vitor lá de Porto Alegre caramba Olha só Ortolândia Ponta Grossa sejam bem-vindos Que bacana show Anápolis Anápolis meu Deus um grande Polo farmacêutico aí tem muito hpl né Caxias do Sul a Paula Olha só de Maringá Porto Alegre Maravilha Tem gente do Brasil todo Aguaí São Paulo manda aguaçu aqui pertinho de Maringá né Maravilha pessoal olha só que bacana ah Leila da bioscience Opa conheço vocês que bacana a empresa de vocês tem um projeto muito legal

a gente gosta muito de ser parceiro de vocês e aproveitando esse gancho também aqui pessoal queria falar na me apresentar né quem é o thago E por que que eu tô aqui falando com vocês e a gente vai falar tanto sobre cromatografia ao longo desse desse projeto aqui né o hplc a jornada olha só a galera de BH que legal ô Bruno tá de longe aí escutando a gente né Maravilha cara tá em Pelotas Tá longe da base né Que bacana vamos lá e quem é o thgo né Eu Assim pessoal assim como vocês né

todo mundo que tem uma relação com a cromatografia líquida ou cromatografia F gazosa Quando vai começar as atividades a gente acaba eh começando sempre do básico né a cromatografia e o conhecimento dela é uma investimento na verdade né você precisa ir agregando conhecimento então eu comecei faz muito tempo já tem uns 14 anos que eu trabalho com cromatografia e tive a felicidade de ter uma uma orientadora no tempo da graduação fiz farmácia né sou farmacêutico de Formação Ela me colocou para trabalhar de com hplc e eu sem saber tive essa sorte né porque na época

eu não entendi muito bem né todo mundo começa a trabalhar com hplc eh acaba não entendendo muito bem como funciona no começo mas aí eu já digo para vocês né vale a pena investir porque esse conhecimento de cromatografia ele devolve muito com relação ao mercado de trabalho todo mundo que tem muito conhecimento em cromatografia líquida tem sucesso eh profissional vocês podem ter certeza disso A gente trabalha hoje eh nesse meio né até hoje é um mercado de trabalho gigantesco e lá atrás comecei a aprender uma um um hplc modular da Wats na época né era

uma bomba 600 um de Gesser tudo separado injetor manual detector UV e o software ow aquilo eu bati muita cabeça até tentar entender e começar a desenvolver métodos cromatográficos né fiz o meu mestrado também nesse nesse equipamento fazendo doseamento de antibióticos na corrente sanguínea de pacientes da UTI foi um trabalho Fantástico e que é acontece até hoje dentro do do hospital mas eu pude aprender muito com aquela situação até porque trabalhava com uma atriz muito complexa né que é o era sangue né a gente trabalhava com plasma para dosear antibióticos na corrente sanguínea dos pacientes

Então tinha muita dificuldade vocês vão ver dentro do processo cromatográfico tem algumas etapas dentro do workflow de de cromatografia né para poder executar o método e tinha muita dificuldade no preparo dessas amostras mas a gente conseguiu vencer e nessa de conseguir vencer aprendi bastante pois tive a felicidade de trabalhar como especialista de campo né fazendo manutenção em equipamentos eu aprendi muito sobre equipamentos da Wats no caso né e e colocava muit os equipamentos dos dos clientes para funcionar de Fato né então foi uma etapa de tanto aprendizado quanto sedimentação de conhecimento e depois ainda fui

fazer um doutorado no desenvolvimento de métodos por lcms e dessa maneira né Consegui acrescentar uma série de cois conos em cromatografia mas não para por aí né o conhecimento de cromatografia ele tem que ser contínuo né a gente tem pessoas aqui né que até estão dando suporte aqui mandaram mensagem como Rodrigo Bressan e que tá tem uma longa caminhada eu tenho certeza que tem muito informação que ainda surge nova possibilidades novas desenvolvimento de métodos com que vocês trabalham hoje né Eh hoje pessoal trabalho na Matrix lcms é uma empresa especializada na linha de cromatografia tanto

líquida quanto gasosa e espectrometria de massa eh nós fazemos a parte de manutenção e tem um time Fantástico que trabalha junto aqui né hoje eh o nosso time ele ele é muito forte porque trabalha muito em conjunto investe muito em conhecimento e é por isso que eu convido vocês e até parabenizo vocês estarem tirando um tempinho de vocês para est aqui acrescentando em conhecimento né Vocês eh Com certeza tão dando um passo aí muito importante na carreira de vocês e isso vai fazer muita diferença daqui a pouco tá eh hoje dentro da da Matrix lcms

a gente desenvolve o mercado né de de de cromatografia né com a uma uma relação muito próxima com a o Wats que é um grande fabricante né de de hplc de uplc espectrometria de massa também é um um uma questão muito forte né muito presente né Nós somos ferramentas deles hoje né em todos todo o cenário Nacional aqui tanto de manutenção quanto de distribuição de consumíveis hoje tá por isso eu tô aqui para falar e abrir esse canal aqui de comunicação com vocês sobre cromatografia tá Eh vamos começar vamos começar essa aula aqui que eu

conversando até né com o time todo aqui da Parte Educacional a gente falou assim olha thago você tem uma hora não vai passar de uma hora né a gente sabe que a discussão de cromatografia líquida ela pode pode ir muito longe né Tem muitas informações aqui mas vou tentar me ater a uma hora também porque eu sei que o tempo de vocês eh pode ser escasso Tá então vamos junto vamos nessa só tem um recadinho aqui que eu preciso dar para vocês tá rapidamente pessoal essa aula aqui ela pode gerar um certificado de participação para

vocês tá então aqui na descrição do vídeo lá embaixo tem uma breve descrição do que nós estamos falando aqui e tem uma série de links passando pelo site tanto do chroma quanto da nossa empresa Matrix lcms depois disso tem alguns links sobre os produtos que a gente tem Eh caso você queira aprofundar o seu conhecimento em cromatografia líquida lá tem diversos cursos aprofundados tanto de cromatografia líquida quanto cromatografia gasosa acessem Caso vocês tenham interesse eh logo em seguida vocês tem dois links pessoal que eh fazem se vocês notaram vocês podem participar de alguns grupos que

a gente tem tanto no WhatsApp quanto no telegram são grupos do chrom que a gente difunde eh informações de atualização vídeos e aulas que a gente venha publicar aqui tá E lá por último mas não menos importante tem um link que vocês podem preencher só que dentro desse link pessoal depois que vocês preencherem toda a a página do formulário do forms lá na última página tem uma questão em que você pode colocar a palavra chave chave dessa aula então ao longo dessa aula aqui eu vou falar a palavra chave para vocês e no momento que

eu falar a palavra-chave daí sim vocês vão lá no no formulário e coloquem essa palavra-chave colocando corretamente a palavra-chave dentro das próximas 24 horas então o vídeo tá sendo lançado agora tem até amanhã à noite caso vocês conheçam alguém que precise de certificado que quer participar quer agregar conhecimento e receber esse certificado já manda agora essa informação pra pessoa também porque senão ah fechou as 24 horas do vídeo Não teremos ah como fornecer o certificado tá até em respeito a quem tá aqui participando agora nesse momento beleza Ah o pessoal tá mandando aqui ó Poline

do Recife Poline grande abraço satisfação eh estar com você aqui também pra gente falar sobre cromatografia galera é isso sobre os recados tá falei brevemente aqui sobre eh alguns passos que eu já passei na minha carreira e queria dizer para vocês que vai ser uma satisfação a gente seguir junto aqui nesse projeto beleza recado dado qualquer dúvida que vocês tiverem também fiquem à vontade para mandar aqui no chat tá estamos à disposição beleza vamos começar minha aula porque senão a gente não acaba beleza galera vou seguinte aula de cromatografia líquida eh O que é um

hplc e como ele funciona pra gente poder falar sobre um hplc de fato eh eu vou passar algumas informações para vocês pra gente se situar tá antes disso eu vou deixa eu mudar aqui minha tela rapidinho Beleza já aumentou minha tela aqui eu fiquei pequeninho aqui do no canto né combinado Olha só qualquer dúvida qualquer detalhe vocês me parem aqui mandem no chat que a gente vai se organizando combinado Opa Meu Deus passou muito informação aqui hein cuidado vamos lá vamos voltar aqui ó antes disso pessoal objetivo da aula pra gente se situar beleza olha

só que interessante aqui primeiro antes de mais nada a gente vai entender como funciona o processo cromatográfico prestem atenção nessa etapa pessoal porque todas as outras aulas dependem de como você entende o processo cromatográfico apesar de ser em algum momento ficar um pouco mais simples para vocês ou se vocês já trabalham com a técnica vai ser uma informação mais simples mas é bom a gente retomar todas essas informações antes de seguir com as próximas aulas nós vamos aprender no detalh quais são cada um dos componentes do hplc E como eles funcionam de fato depois disso

nós vamos falar quais são as principais desafios encontrados no hplc e vamos abrir também para vocês fazerem algumas perguntas e respostas Caso vocês tenham uma dúvida com a utilização do hplc se vocês eh tiverem beleza pessoal Olha só isso aqui do lado direito Olha só visão Geral do curso de hplc a jornada então assim o que a gente tá propondo A cada 15 dias eu vou dar uma aula de HP e a cada 15 dias o Bruno vai dar uma aula de CG a gente vai intercalar nem sempre vai ser terça-feira talvez pela nossa demanda

de trabalho que a gente tem Mas a gente sempre vai avisar pelo nosso Instagram então caso você ainda não siga no nosso Instagram segue lá @cac você é bem-vindo ao nosso canal e a gente vai passar todas as informações de datas de aula assunto que a gente vai abordar mas queria chamar a atenção de vocês paraa seguinte situação Hoje é aula de do que é um hplc e como ele funciona né as duas próximas aulas são sobre eh colunas cromatográficas e as suas especificações nós vamos falar pessoal desde a silanização até ligantes diferentes diferenças de

base de ligantes diferenças de seletividade tem muito detalhe nessas duas aulas que com certeza vai ajudar vocês a entender muito bem todos os passos de fatores que influenciam na separação cromatográfica e também princípios de desenvolvimento de método e dali em diante a gente segue diferenças entre uplc e hplc análise de vitaminas por onde começar desafios de retenção de compostos polares Isso aqui vai longe pessoal ao todo o planejamento dessa jornada do hplc é para 24 aulas então aqui tá uma parte delas mas nós vamos seguir muito distante Então vem com a gente beleza vamos começar

aqui de fato a entender o que é a nossa cromatografia né E o nosso hplc a gente fala muito de hplc fala Poxa mas tá sendo empregado tanto assim hplc eh Por que que é tão importante pessoal a gente primeiro tem que olhar qual o desafio a gente tem e na natureza em todos os segmentos que a gente aborda a gente tem inúmeros desafios né então se a gente vai pra área de alimentos por exemplo a gente tem desafios de determinação de algumas moléculas que estão lá presentes dentro dos alimentos né se é um antioxidante

se é um açúcar eh Quais são as as moléculas que a gente precisa determinar e na maioria das vezes elas estão dentro de uma mistura né então quando você pega um alimento e precisa determinar um açúcar o açúcar não tá livre dentro do alimento pelo contrário ele tá em meio a fibras em meio a proteínas em meio a lipídios em meio a metabólitos e nessa etapa de tá em meio à outras eh os outros componentes a gente tem um baito desafio que é separar os componentes de uma ura E além disso como elas estão em

concentrações mínimas como a gente faz para detectar essas moléculas E aí que entra a cromatografia cromatografia é uma técnica de separação de compostos a gente vai ver na definição que a gente tem fiz questão de colocar aqui para vocês pessoal uma uma informação que eu imagino que seja muito importante quando a gente pensa no começo da carreira cromatográfica eu tinha muita dificuldade em tentar em em conseguir entender no começo da carreira eh o que de fato a cromatografia era né parecia algo muito abstrato quando a gente tinha uma aula de cromatografia lá na graduação eh

Ficava muito abstrato e eu nem sabia qual que era o ponto de fato de todo o workflow da cromatografia que a gente falava do hplc por exemplo então fiz questão de trazer isso aqui para vocês por hoje a gente vai falar aqui pessoal do que é um hplc de qual é o processo cromatográfico e como ele funciona só que dentro do workflow da cromatografia se eu passar uma um desafio para vocês olha separa para mim açúcares você precisa passar primeiro por um preparo de amostra depois você precisa desenvolver um método Depois disso você precisa fazer

as análises cromatográficas validar o métodos em algum em alguns casos e ter a rotina de análise cromatográfica e depois tratar os dados então tem uma série de coisas hoje o que a gente tá falando aqui a gente vai falar de tudo relacionado ao H LC e o processo cromatográfico que tá dentro de desenvolvimento de método e análises cromatográficas tudo bem antes disso a gente tem ainda teria que ter o preparo da amostra adequado e depois a gente teria que se preocupar ainda com o tratamento de dados tá fiz questão de trazer essa Big picture aqui

para vocês essa visão macro porque fica mais fácil da gente entender de agora em diante e pra gente começar a entender pessoal vamos buscar na definição o que ér ografia de Fato né então aqui eu coloquei até o título cromatografia líquida uma técnica de separação mas a definição de cromatografia tanto líquida quanto gasosa segunda e o PAC é a seguinte a cromatografia é uma técnica utilizada na separação dos componentes eh de uma amostra os quais se distribuem em duas fases uma estacionária e a outra móvel a estacionária pode ser um sólido um líquido retido sobre

o sólido ou um gel então Opa a gente tem aqui mais dois componentes aqui paraa separação da nossa mistura eu tenho aqui uma referência de uma fase estacionária e tenho aqui uma outra fase uma fase móvel E aí você vai me perguntar thgo mas tá eu tenho agora minha amostra eu tenho uma fase estacionária e uma fase móvel E agora o que que eu faço com tudo isso vou mostrar mais uma definição um pouco mais detalhada sobre cromatografia né tanto líquida quanto gasosa então entendam só comigo como que ela funciona a cromatografia é um método

físico-químico de separação de componentes de uma mistura realizada através da distribuição desses componentes em duas fases que estão em contato íntimo Opa eu tenho mais uma informação aqui então quer dizer que a minha fase estacionária e a minha fase móvel estão em contato íntimo uma das fases permanece estacionária que é a nossa coluna cromatográfica né enquanto a outra se move através dela que é a nossa fase móvel durante a passagem da fase móvel sobre a fase estacionária Olha só agora os componentes da mistura são distribuídos pela fase pelas duas fases de tal forma que cada

uma delas é seletivamente retida na fase estacionária o que resulta na migração diferencial desses componentes captaram que pra gente ter uma separação cromatográfica o analito os nossos compostos de interesse eles precisam necessariamente ter uma relação e uma uma uma conexão uma interação com a nossa fase estacionária nós vamos falar sobre colunas cromatográficas e a definição de coluna cromatográfica e os pontos de seleção de uma coluna cromatográfica passa pela seleção de relação em que você olha pro analito e diz olha meu analito vai ter interação necessariamente com a nossa fase estacionária caso contrário a gente não

consegue a separação e a fase móvel vem para poder eh migrar fazer a eluição dessa desse analito de uma maneira que seja controlada de uma maneira que eu consiga influenciar e ter repetibilidade depois essa figurinha que vocês veem aqui embaixo pessoal foi uma figurinha que baseado nessa definição ela foi criada aqui né pelo cromac em que a gente traz algumas informações interessantes nela né se você olhar os três pilares da cromatografia analito amostra fase móvel fase estacionária a gente consegue concluir que a gente só consegue uma separação na cromatografia líquida Desde Que o seu analito

seja solubilizado na nossa fase móvel a nossa fase estacionária e a nossa fase móvel precisa ter interação mas precisa ser eh ter imbil E além disso eu também preciso ter interação entre os analitos e a fase estacionária certo espero que vocês tenham entendido Esse passo aqui que é super importante E aí eu trago um videozinho que traz uma a execução dessa definição da Carol cins né eu não citei Ela ali no slide anterior mas acredito que todos vocês que já trabalharam com cromatografia em algum momento tiveram aquele livro verdinho né da Carol Collins também galera

esse vidinho aqui olha só que interessante né lembra que eu falei da fase móvel e da fase estacionária em contato íntimo então o que que significa significa que eu tenho uma fase passando através da nossa fase estacionária uma fase fixa e uma fase móvel a partir do momento que eu introduzo os meus analitos na nossa fase estacionária carregada pela nossa fase móvel como eu tenho diferentes componentes dessa mistura cada um com uma característica diferente eu também vou ter uma interação diferente com a nossa fase estacionária em que eu vou ter uma migração diferente tendo uma

migração diferente através da minha fase estacionária eu consigo determinar que cada analito elui de uma maneira diferente da nossa fase estacionária como eu tenho cada analito elindo de uma maneira diferente eu consigo determinar quais são eles Quais são esses analitos tá conseguiram perceber que os componentes que Pass passam através da nossa fase estacionária interagiram de uma maneira diferente com a nossa fase estacionária Então essa interação ela é específica de cada analito se ela é específica de cada analito então eu consigo predizer qual vai ser a nossa separação Guarda essa informação por enquanto que agora a

gente vai seguir com aprofundamento dessas determinações beleza tranquilo até aqui mandem um OK se o meu vídeo tá ok se o meu áudio Tá ok também e só para eu saber aqui exatamente se vocês estão e escutando bem ou não beleza bacana Tem uma galera aqui assistindo ao vivo pessoal que chegou depois sejam bem-vindos aqui é uma satisfação est com vocês aqui no no canal da chac olha só a Amanda aí já mandou a Paula também Ah bacana eu vi aqui que o pessoal da maltaria aí tá assistindo a gente também um abraço maltaria de

Ponta Grossa eh muito bom que vocês estão aqui em breve a gente se vê aí também tá dentro da classificação de de cromatografia líquida pessoal além da nossa estrutura base de definições né então existem vários livros Eh que que trazem definições do que é a cromatografia eh e dentro dessas desses livros de quais definição Quais são as definições a gente tem também algumas classificações da cromatografia líquida e quais são essas classificações da cromatografia líquida pessoal Existem algumas diferentes o que que eu me proponho a trazer aqui para vocês uma classificação e a mais difundida que

traz a determinação eh de qual é o tipo de cromatografia que você tá fazendo baseado na polaridade das moléculas da fase estacionária e da fase móvel que você tá utilizando então todas as vezes que você for trabalhar com cromatografia líquida vai ser inevitável você definir ou por cromatografia de fase reversa ou por cromatografia de fase normal existem outros modos de eluição não vou citá-los agora aqui mas saibam que existe outros modos de eluição mas não vou aprofundar neles porque senão vai virar uma confusão aqui tá então basicamente eh eu trago aqui para vocês a importância

das da polaridade das moléculas perfeito a Marlúcia Obrigado Marlúcia obrigado pelo feedback pessoal eh quando a gente olha paraa importância da polaridade das moléculas ao longo de toda essa jornada aqui pessoal do hplc eu vou falar algumas vezes com vocês sobre características tanto das moléculas quanto da fase estacionária quanto da fase móvel tá todas as vezes que eu citar algumas características vai ser inevitável a gente passar também pela polaridade no desenvolvimento de meto lá na aula C quando a gente passa todosos os os passos do desenvolvimento de método lá vocês vão ver que para começar

a desenvolver um método primeiro lugar que a gente olha é a molécula a gente olha pras características dessa molécula a gente olha e qual é a matriz que essa molécula eh tá presente então se é alimento se é sangue se é Solo se é água qual que é a matriz e dentro dessa avaliação das moléculas a gente vai conseguir propor qual é o modo de eh eluição o modo cromatográfico a gente vai utilizar para poder determinar essas moléculas tá então primeiro a gente olha paraa molécula Eu tenho dois tipos de moléculas que eu posso dizer

sendo apolares ou então moléculas polares Quando eu olho para moléculas apolares pessoal eh moléculas apolares tendem a interagir com fase estacionária apolar então para análise de moléculas apolares são ideais para retenção e separação sob condição de eh cromatografia líquida de fase reversa em fases estacionárias e hidrofóbicas eh no slide anterior a gente tinha visto que a fase móvel e a fase estacionária elas precisam ter imbil então uma vez que eu tenho uma fase estacionária Apolar eu não posso ter uma fase móvel polar aliás desculpa Apolar porque senão eu acabo tendo uma solubilização da minha fase

estacionária e eu perco toda a capacidade de eh retenção dos meus compostos eu perco a capacidade da minha fase estacionária surtir efeito então eu não posso utilizar fases móveis com características apolares o inverso disso tudo quando eu olho para analitos polares eles vão exigir uma fase estacionária com característica polar por exemplo sílica Siano ou amino que são eh fases estacionárias comuns eh polares e ao mesmo eh tempo eu não posso ter uma fase móvel com característica polar eu preciso ter uma fase eh fase móvel com característica Apolar dito isso aqui pessoal essas duas definições que

são muito simples gostaria de colocar alguns pontos de vistas aqui para vocês primeiro a cromatografia de fase reversa ela é muito mais difundida porque ela consegue de Fato né separar e resolver problemas aqui pra gente que são que pega a maior Gama possíveis de de moléculas mas existem algumas moléculas muito desafiadoras que são as moléculas polares açúcares alguns pesticidas né como glifosato que é uma dificuldade muito grande de eluição E aí para isso a a gente tem que lançar mão de alguns artifícios tanto de colunas cromatográficas com características apolares mas que consegue separar moléculas polares

quanto algum método inclusive de fase normal ou então um modo de eluição chamado hilic que eu não vou falar dele aqui hoje nas próximas aulas a gente vai abordar esse esse tema também tá só gostaria que vocês entendessem essa classificação nesse momento e que a a definição dessa e desses termos né de cromatografia de fase normal ou de cromatografia de fase reversa eles estão eh disponíveis em alguns documentos que vocês vão receber Caso vocês preencham o nosso formulário que tá lá embaixo tá que está lá no aqui no rodapé da nossa tamb tá você preenchendo

todo o formulário você vai receber dois links um link da das classificações e de como funciona né cromatografia da origem dela e também um outro sobre o workflow da cromatografia eh não não deixem de acessar ainda sobre polaridade pessoal aqui não é uma aula de química mas eu preciso introduzir esse assunto e lembrar com vocês né O que é polaridade de Fato né polaridade pessoal por definição é a capacidade de uma molécula de possuir regiões em sua estrutura química com cargas elétricas a diferença de eletronegatividade entre átomos presentes na molécula é Quem promove essa polaridade

então para buscar essa esse termo polaridade e como a gente tá tratando aqui da definição de cromatografia baseada na polaridade a gente precisa relembrar aqui algumas condições né a polaridade ela tá relacionada lá pelos elementos químicos da Tabela Periódica então uma vez que você tem um elemento muito eletronegativo dentro de uma molécula com outros outros eh elementos que não são eletronegativos Você pode ter polos distribuídos nessa molécula isso traz pra gente uma característica de molécula polar aqui embaixo eu trago para vocês um exemplo que é a água solvente mais polar que a gente tem inclusive

na cromatografia tá então aqui tá o exemplo de uma molécula polar e trago algumas outras moléculas aqui né tomem um pouco de cuidado porque não é só sempre que a gente tem um elemento eletronegativo na molécula que nós temos uma molécula polar muitas vezes a distribuição geométrica dessa coluna traz uma característica Apolar também então sempre avaliem com cuidado tá se essa molécula é polar ou se ela não é polar inevitavelmente na cromatografia e no desenvolvimento e no aperfeiçoamento da técnica cromatográfica você precisa ficar muito relacionado e atento paraas características tanto do seu analito com relação

à polaridade e também com relação à fase móvel a sua fase acionária diante disso pessoal trago aqui uma imagem que é um pouquinho mais explicativa de tudo isso que eu falei tá então quando a gente olha pra polaridade a classificação da nossa eh cromatografia líquida a gente olha primeiro pras moléculas então eu tenho lá na na natureza né algumas classificações já moléculas como sais ácidos álcoois cetonas és eles têm tendem a ter uma característica mais polar sempre que eu tenho uma uma característica mais polar do meu analito eu vou direcionar uma fase estacionária com característica

também polar quando eu tenho uma fase estacionária polar eu tenho uma cromatografia de fase normal e automaticamente eu preciso utilizar uma fase móvel com característica Apolar tá e o objetivo dela é retener reter moléculas polares a gente vai ver ao longo do do processo de jornada do hplc que nem sempre isso é uma verdade por quê a as moléculas polares que é um baita desafio de separação a gente pode utilizar cromatografia de fase reversa desde que a gente saiba conduzir a seleção da fase estacionária E também o método cromatográfico vou mostrar isso no detalhe para

vocês nas aulas de coluna cromatográfica e na etapa de desenvolvimento de método também quando eu tenho moléculas com características a Apolar eu necessariamente preciso de uma fase estacionária Apolar e automaticamente eu vou ter que eh utilizar moléculas ou fase móvel com característica polar E por que que a fase reversa Pessoal vocês sabem disso já devem ter escutado Em algum momento por que a fase reversa ela é muito mais difundida porque na fase reversa pessoal eh além de abranger a maior parte de moléculas da natureza e e capacidade de separação ah a gente tem que as

fases móveis aqui elas têm uma característica de ter pouca eh toxicidade e elas também têm muito pouco impacto no na degradação dos nossos hpcs por esse motivo a cromatografia de fase reversa ela é muito mais aplicável do que a cromatografia de fase normal exceto em alguns casos muito específicos tá dito isso em entendido o processo cromatográfico e o hplc thago nós estamos aqui para falar sobre hplc e até agora eu não vi um equipamento aqui então quando a gente entende o processo cromatográfico fica mais fácil da gente colocar ele dentro do nosso hplc e o

hplc pessoal é a evolução da cromatografia líquida na verdade eh houve uma necessidade a indústria eh teve uma busca muito grande por determinação e quantificação de novas moléculas isso gerou a necessidade de criar um equipamento capaz de ser reprodutível ser sensível e de uma maneira eficiente entregar os resultados daí surgiu o nascimento do nosso hplc tá o nosso hplc né que tem a sigla eh em inglês aqui ou então em português quando a gente eh traz pro nosso português né que é o cly cromatografia líquida de alta eficiência no hplc hyperform líquid de chromatography quando

a gente olha aqui para o que é um hplc a gente tem alguns componentes muito característicos do hplc tá independente do fabricante Independente de qual você tá utilizando né E até aqui aproveito para pedir a interação de vocês para quem já trabalha com hplc Diga para mim aqui qual é o modelo do hplc que vocês trabalham atualmente se você atua em uma rotina cromatográfica ou se você atua com mais de um equipamento Qual que é o modelo Qual que é o fabricante deixa aqui pra gente que vai ser bem legal de saber tá todos os

hplc pessoal eles têm necessariamente né alguns componentes como frascos e reagentes para poder armazenar o solvente e via de regra você vai ver sempre na parte superior do equipamento para descer por gravidade um desgaseificador bombas cromatográficas injetor coluna cromatográfica detector e um sistema de dados para para poder adquirir todos os dados aqui e você processá-los tá bom todos esses componentes aqui eles são característicos e nessa ordem também então Eh você não vai ver um um um hplc com uma bomba depois do injetor A não ser que seja uma bomba reagente para poder ser utilizada lá

no detector tá eh mas via de regra um hplc tradicional você não vai ter componentes de uma maneira invertida Então você saber disso aqui de uma maneira bem correta é super interessante porque você consegue e embasar o que você vai utilizar em campo tá olha só aqui ó temos um PLC da Wats Que bacana e Célia e mais alguém mais alguém atua aí com algum hplc fale pra gente aí porque ó trouxe um exemplo aqui de um hplc que é super robusto conhe no mercado que é o hplc Alliance 2695 da Wats equipamento que até

hoje é fabricado mas esse modelinho aqui prata é um modelo de 1994 se eu não me engano tá posso estar enganado aqui com o ano mais é um hplc que a gente encontra muito dentro dos clientes tá porque um hplc super robusto né então fiz questão de trazer ele aqui para vocês né exemplificar de uma maneira mais clara a aqui PR quem ainda não teve contato com o hplc por é quem ainda não teve contato Até fica muito subjetivo né O que é um HC como ele funciona de Fato né Então tá aqui os nossos

frascos e reagentes e aqui consigo dizer para vocês opa saiu mais alguns aqui ó HC da Agent temos um da shads também da Paula Obrigado pessoal por compartilhar Qual equipamento vocês estão utilizando tem algumas considerações importantes aqui falei muito de fase móvel né Opa trabalha com 2695 e um conjunto quatro micro da Wats Que bacana gan Esse sistema é um sistema é também muito robusto que tem muita história né um sistema já um pouquinho mais antigo né mas que tem uma entrega aí de resultado fantástica assim né Opa Paula gapc da Wats bacana pessoal vamos

me falando aqui eh que é bem-vinda essa informação compartilhada tá tem algumas eh situações aqui pessoal que eu queria compartilhar com vocês super importante tá pra rotina de vocês estamos falando sobre hplc um dos pontos Chaves aqui pro hplc é você saber qual tipo de solvente eh você pode ou não utilizar Como eu disse para vocês a cromatografia de fase reversa ela é muito mais difundida do que a cromatografia de fase normal apesar de da cromatografia ter nascido na cromatografia de fase normal quando eu falo de cromatografia de fase reversa o solvente mais utilizado disparado

é a água só que na cromatografia eh líquida pessoal nós temos que a cromatografia líquida ela é inimiga de algumas coisas primeira delas é bolha a segunda é partícula então toda vez que eu tiver partícula toda vez que eu tiver bolha no sistema cromatográfico eu ten um problema como eu tô falando de fase móvel tô falando de um líquido tem algumas especificações que tem ser respeitadas para fase móvel então fiz questão de colocar aqui um sistema de ultra Purificação um mqu talvez muito conhecido de vocês eh e algumas especificações de como essa água tem que

estar presente na fase móvel para evitar problemas no nosso hplc bem como o uso de solventes orgânicos grau hplc quando você digita pessoal você entra lá no site da merc ou você entra em contato aqui com o pessoal do nosso time de vendas e e pede assim eh Tatiane me manda um um solvente grau hplc tatian vai buscar aqui tem uma série de solventes grau hplc grau Gradiente grau lcms grau pa E aí qual que eu posso utilizar solventes no mínimo com grau de Pureza grau hplc caso contrário você pode ter o risco não só

de ter uma impureza nesse nesse seu é solvente bem como ter uma essa essa impureza pode influenciar na sua linha de base na sua detecção no seu detector Então esse alinhamento de informações ele tem que ser muito claro aqui tá tem algumas outras especificações que vocês têm que seguir e são informações que vê a seguir por enquanto gostaria que vocês entendessem que o solvente num apc ele tem que ter tem que ser de muita qualidade as bombas cromatográficas estão localizadas ali embaixo eu posso ter elas de dois tipos diferent eh bombas binárias e bombas quaternárias

são os dois tipos mais comuns de fundidos disparado já ouvi falar de uma bomba terciária muito pouco difundida tá não conheço pelo menos nemum cliente nem um um hplc que tenha essa bomba Eh terciária aí tá injetores manuais e automáticos são as duas características que a gente tem forno de colunas depois disso o detector então aqui nessa figurinha que a gente tem eu fiz questão de dispor para vocês aonde tá cada uma delas para vocês saberem O que que tem por aí vamos trabalhar no detalh agora o que que é uma bomba cromatográfica e como

ela funciona Opa saíram mais alguns hplc aqui ó hplc da Waters alguns agel Eu imagino Alessandra né Que bacana pessoal que legal aí você vocês já trabalham inclusive né e de agora em diante pessoal a gente vai pisar num passo um pouquinho mais aprofundado aqui tá a gente vai falar no detalhinhos componentes presentes nessa bomba cromatográfica então quando a gente pega um hplc aqui dentro do hplc Se eu der um zoom só na bomba cromatográfica aqui eu consigo ver alguns componentes dela essa visão que a gente tá tendo aqui na figura um é de frente

com hplc essa aqui é uma visão de cima né e aqui a gente chama essas dois componentes aqui que vocês estão vendo vamos pegar a figura três como exemplo e a figura dois como os torpedos cromatográficos Então eu preciso que vocês tenham um pouco de fé agora um pouco de imaginação e Venham comigo ó o solvente tá aqui em cima certo eles vão descer os solventes por gravidade uma vez que o solvente desce por gravidade vamos entrar aqui na figura dois ó solvente desceu por gravidade todas as vezes o solvente vai passar por um componente

chamado desgaseificador aí você vai dizer assim para mim thago eu preciso desgazeificada vez sim mesmo o hplc tendo eh desgaseificador Sim você precisa desgaseificacão quanto mais processo você tiver para eliminar bolhas melhor vou colocar eh no ultrassom para eliminar as bolhas a fase móvel sim coloque vou usar o desgaseificador também online vou utilizar dessa maneira você diminui a possibilidade de ter bolhas aqui no seu componente no seu hplc fase móvel passou por dentro do desgaseificador vem por uma válvula chamada válvula de Gradiente proporcional tá então Acontece uma mistura de solventes nela e essa mistura de

solvent segue pro nosso torpedo cromatográfico esses componentes aqui os torpedos cromatográficos eles são responsáveis por manter o fluxo constante da fase móvel a função da bomba cromatográfica pessoal é única e exclusivamente manter o fluxo da fase móvel constante porque com o fluxo da fase móvel constante eu consigo ter o quê reprodu idade que é o que a gente busca no nosso hplc certo então bomba cromatográfica aqui eu tenho dois torpedos e aqui no meio Eu tenho um transdutor de pressão vocês vão notar que no hplc tem algumas informações que são muito úteis paraa nossa rotina

cromatográfica o fluxo constante é uma delas e a pressão o mais constante possível também é uma delas para quem usa o PLC aqui vai saber né até vi que a Sandrine tá aqui Sandrine um abraço para você que bom que você tá aqui você usa lá um uplc E aí você para fazer a injeção você fica esperando aparecer um Delta menor que 10. PLC 10 PSI quando o delta tá abaixo de 10 PSI significa que o sistema tá o quê estabilizado necessariamente ele tá estabilizado nem sempre pessoal lembrem-se que aquela interação entre fase móvel e

fase estacionária ela é dinâmica Então não é porque o delta tá muito baixo que muitas vezes a coluna tá equilibrada mas via de regra é um dos parâmetros o delta baixo de pressão a gente começar a fazer as nossas análises cromatográficas tá eh esse essa variação de pressão ela tem que ser monitorada pelos transdutores de pressão que estão aqui embaixo então seguindo o fluxo cromatográfico a gente tem fase móvel entrando no deesser passando pela gradiente de proporção passa pelas bombas cromatográficas e segue pro nosso injetor antes de seguir pro injetor pessoal queria desmembrar para vocês

quais são os componentes de uma de um torpedo de Fato né então você você vai virar para mim e falar assim thgo agora eu eu tô trabalhando com hplc aqui tô entendendo como é que funciona o processo cromatográfico mas eu queria saber no detalhinhos tubulações certo então uma vez que essa tubulação chegou na bomba cromatográfica vamos imaginar agora que esse componente aqui ó que vocês estão vendo é esse mesmo aqui só que cortado de uma maneira eh e agora é longitudinal ou transversal enfim essa essa bomba cortada no meio tá de uma maneira longitudinal tá

eh quando eu tenho essa bomba e essa cabeça de bomba cromat cortada no no no meio de uma maneira longitudinal a gente consegue ver e visualizar todos os componentes da bomba a fase móvel entra ela é admitida na cabeça da bomba cromatográfica através de um componente muito conhecido de vocês chamada check valve seja provavelmente quem já trabalhou e trabalha com com hplc eh já teve o contato em algum momento com as check valves as check valves Elas têm a a função de admiti o solvente para a câmara cromatográfica e depois que ele admite ela trava

Então olha só vou falar alguns componentes aqui para vocês para ficar mais claro cheque valve cheque valve Câmara de bombeamento pistão vocês estão vendo meu cursor aqui pistão cromatográfico e selos de retenção diante desses componentes aqui pessoal na rotina cromatográfica isso aqui acontece de uma maneira muito rápida o bombeamento tá entendam que nessa pass nessa parte de trás aqui eu tenho um motor que fica empurrando paraa frente o pistão e voltando tá para trás o solvente Ele É admitido na câmara de bombeamento o pistão empurra esse solvente o solvente sobe toda vez que o pistão

empurra esse solvente solvente sobe ele trava aqui na cheque valve a cheque valve acontece o travamento dela para não permitir que esse solvente volte aqui para trás tá o solvente segue aqui o seu caminho para chegar lá no injetor tá isso acontece de uma maneira bem rápida a maior parte dos hplc tem essa câmera aqui de 100 microlit tá então aí você faça a sua conta né Você tem um fluxo de 1 ml por minuto quantas vezes eu preciso empurrar e voltar esse pistão aqui para bombear um fluxo de 1 ml por minuto algumas informações

e considerações importantes aqui né assim como eu disse a bomba cromatográfica ela tem a função de manter o fluxo constante resistir a pressão exercida minimizar a oscilação de pulsação do bombeamento da fase móvel manter a linearidade da faixa de fluxo essa cabeça de pistão aqui esse torpedo cromatográfico ele pode variar o bombeamento tanto de 0 1 ml por minuto até na maior parte dos hplc de 10 ml por minuto é um Range bem grande né Isso vai variar de acordo com o desenvolvimento de mtodo que você pode ter proporcionar a eluição isocrática e Gradiente não

vou falar disso hoje mas a gente vai voltar a abordar a técnica né de de eluição por e Gradiente Principalmente quando a gente precisa separar alguns componentes que nós estamos com com problema e alguns amigos eh eh de vocês né de problemas comuns para quem utiliza eh hplc a variação de pressão e vazamento aqui pessoal assim como eu disse né anteriormente o hplc é inimigo de gases então todas as vezes que a gente tem uma bolha presente aqui nesses componentes Você tem uma variação de fluxo e é tudo que você não deseja quando você tem

partículas presentes aqui nesses componentes Você pode ter o rompimento desses selos de vedação com o rempo dos selos de vedação a Imaginem uma pressão muito alta aqui na essa Câmara de bombeamento você acaba não tendo eh o fluxo constante Você tem o extravasamento desse fluxo pros componentes internos uma vez que você tem o extravazamento você não consegue manter a reprodutibilidade da sua bomba cromatográfica nós temos uma aula pessoal se eu não me engano a aula sete eh vou falar com vocês só sobre problemas encontrados no hplc e como resolvê-los fiquem ligados porque lá a gente

fala no detalhinhos resolve uma variação de pressão como que você resolve um vazamento que você pode estar tendo no seu hplc tá Ah para ficar um pouquinho mais claro um gfzin aqui entendam como sendo componente um a parte de admissão da fase móvel O componente dois de eh continuidade dessa fase móvel componente 3 check valve componente 4 check valve componente 5 pistão sol Ele É admitido quando o pistão retrai e quando o pistão Empurra a fase móvel a cheque valve anterior ela trava não deixando esse solvente voltar pra sua tubulação original o solvente Segue o

seu caminho pra check valve 4 e para nosso pro nosso injetor tudo bem até aqui pessoal isso é um pouco do detalhe eh da dos componentes de de bomba cromatográfica e agora nós vamos entrar rapidamente aqui no nas instruções de como o injetor funciona tá injetor pessoal e considerando lá todo o processo cromatográfico o solvente tá passando eh por dentro das tubulações é bombeado pela fase móvel chega no nosso injetor Qual é a função do meu injetor Imaginem só pessoal que o fluxo Eu tô batendo nessa nessa tecla até agora o fluxo da nossa fase

móvel ele não pode parar ele tem que ser constante Agora eu te pergunto pergunto como que faz para introduzir a amostra no nosso hplc sem parar o fluxo de bombeamento vocês concordam comigo que o fluxo sai da bomba passa no injetor tem que passar pela coluna se manter constante e qual momento eu coloco eh qual momento eu introduzo a minha amostra para isso pessoal foi necessário desenvolver um injetor tanto manual quanto automático capaz de introduzir a amostra no sistema cromatográfico e não influenciar no no no seu fluxo eh tem um injetor que é muito conhecido

né pelo fabricante rodine esse injetor ele tem uma capacidade muito grande né de execução só que é um injetor manual depois disso vieram alguns desenvolvimentos de injetores automáticos aqui tá Então os componentes né sempre presentes no nosso injetor sempre todas as vezes você vai ter os componentes como agulha seringa Loop válvula de injeção são componentes para todos os injetores isso é comum tá Independente se é automático ou se manual e fique sempre atento com o solvente de limpeza da agulha e o solvente de Purga da seringa de injeção nos injetores automáticos esses solventes influenciam no

processo cromatográfico durante o desenvolvimento de método Pessoal vocês vão entender lá nas aulas que E como a sua molécula ela precisa est de interesse ela precisa est solubilizada na sua faz móvel e a força do solvente influencia na separação cromatográfica você também tem que se atentar pros solventes que estão se relacionando com a sua molécula durante o processo cromatográfico e no injetor Você tem o solvente de limpeza da agulha e também o solvente de Purga da agulha e você não pode ter uma discrepância de força desses solventes caso senão você pode ter uma distorção cromatográfica

quando a gente fala de resolução de problemas resolução de problema no hplc a gente fala muito de eh como melhorar a separação cromatográfica e como melhorar o pico cromatográfico e aqui e lá a gente lembra Quais são os solventes a gente tem que utilizar tá então problemas comuns quando o injetor não tá funcionando corretamente é a variação do volume de injeção e contaminação entre injeções quem nunca né teve uma contaminação aí entre injeções né E aí vai resgatar o histórico a do injetor acabou não sendo bem feita aqui um exemplo pessoal para trazer para vocês

parece super confuso isso aqui mas não é olha só todo injetor e é legal que você saiba como ele funciona porque todos eles têm o mesmo princípio fica muito fácil vocês entenderem então o injetor igual eu comentei né sempre vai ter uma agulha e uma seringa certo então dentro dessa agulha e dessa seringa existe uma um ponto de introdução dessa amostra no nosso injetor e lembre-se o que eu acabei de comentar os injetores Precisam fazer introdução da amostra sem deixar o fluxo parar Então pensem só como eu vou fazer isso a agulha do nosso injetor

ela vai introduzir eh dentro do seu Vaio de amostra puxar a quantidade eh esperada e ela vai vir pra válvula de posição de injeção e preencher uma coisa chamada lup de injeção então aqui na figura um quando eu tô na posição de carregamento do meu injetor eu vou introduzir a minha amostra dentro do loop e o o o restante o que não couber dentro do loop Ela vai para um descarte certo tudo bem A partir do momento que eu peço para meu injetor fazer a injeção injetor executa a injeção essa esses componentes aqui do injetor

vão eh se movimentar de uma forma em que depois da introdução da amostra esse rotor ele vai fazer a sua fase móvel que está aqui chegando pelo bombeamento passar através do loop e carregar sua amostra pra coluna essa execução pessoal ela é muito rápida ela é muito rápida rápida o suficiente para não influenciar na pressão e no fluxo da sua fase móvel então você não vê muitas vezes acontecendo a injeção no seu hplc mas por trás lá nos componentes internos a cada injeção existe um rotor que faz o movimento para poder migrar a fase a

fase que tá sendo bombeada fase móvel coletar a sua amostra e seguir pra interação da sua coluna aquela mesma aquele mesmo videozinho que eu tinha separado para vocês agora ele já vai ficar mais um pouquinho mais claro Vejam só dois componentes aqui em cima sendo eh bombeados pela bomba cromatográfica acontece a mistura do solvente passa no injetor coleta a sua amostra e vem pra sua coluna cromatográfica aqui acontece a migração diferencial dos comp baseada na interação da sua com a sua fase estacionária vem pro detector o qual capta um sinal e transforma em uma coisa

chamada cromatograma a gente vai falar sobre alguns componentes do cromatograma nos slides que vem por aí tá então para eu não eh ficar aqui passando muito do meu horário já me alertaram Aqui vou falar sobre os outros componentes também tá depois como vocês viram né amostra introduz no seu hplc ela segue pro forno de colunas Qual é a função do Forno de colunas propriamente dito primeiro antes e mais nada estabilizar a temperatura da sua coluna cromatográfica e controlar a temperatura dela manter a temperatura constante durante a análise cromatográfica existe uma recomendação pessoal que é a

seguinte a sua coluna cromatográfica e o seu forno cromatográfico ela precisa tá 5º acima da temperatura ambiente Então vou vou colocar aqui aqui a temperatura ambiente como sendo de 25º Teoricamente você precisa ter no mínimo uma temperatura de 30º no seu forno de colunas para você manter a reprodutibilidade do seu método mas tô pensando só em reprodutibilidade a a temperatura também pode influenciar na separação dos seus componentes Então não é qualquer temperatura que eu vou utilizar eu posso forçar uma temperatura de uma maneira intencional para separar melhor os meus componentes ou então manter a reprodutibilidade

dos seus dos suas análises tá colunas cromatográficas convido vocês a ficar comigo pra próxima aula que eu vou passar no detalhe quais são os componentes de cada coluna Quais são os tamanhos de partícula que que influencia Quais são as diferenças de partículas de colunas cromatográficas Quais são os ligantes mas aqui pra gente não deixar de abordar pessoal eu tenho a seguinte situação aqui eu tenho sempre uma entrada da coluna cromatográfica muitas pessoas UTI eh uma pré-ca aqui algumas não utilizam pré-ca nas suas análises a pré-ca pessoal ela tem uma única exclusiva função de reter partículas

que podem chegar na sua coluna cromatográfica pré colola participa de separação cromatográfica não participa pré-ca não exerce nenhuma função na separação dos seus analitos ela pode distorcer o seu pico caso a pré-ca esteja suja E aí é uma outra situação que a gente vai falar também mas pré-ca a função dela é reter partículas então componentes presentes numa coluna é tubulação de introdução pré-ca eu preciso sempre ter um disco poroso aqui do qual ele não eh pode permitir que a fase estacionária saia da coluna cromatográfica eu tenho todas as partículas da fase estacionária mais um disco

aqui para evitar que essa fase eh saia da minha coluna cromatográfica e uma tubulação de saída para poder seguir pro pro detector problemas comuns na nossa coluna cromatográfica é o seguinte é entupimento na coluna perda de eficiência na separação e os tamanhos mais comuns de partículas que vocês devem utilizar no seu dia a dia é colunas de 2 a 5 micrm e colunas de uplc menor que 2 micrm vou fazer o convite aqui para vocês para vocês se interagirem comigo aqui novamente eh qual é o tamanho da partícula de coluna que vocês utilizam Vocês conseguem

me falar se é de uplc se é de hplc vou dar uma informação aqui para vocês que é bem interessante pessoal que é a seguinte Ah eu fiz um levantamento de quais eh são os tamanhos de partículas mais utilizadas no mundo eh e sabe qual é a partícula o tamanho de partícula mais utilizada no mundo hoje atualmente são colunas de tamanho de partícula de 3.5 micrm a tendência pessoal é que o tamanho da partícula sempre vá na direção de diminuição Por quê vocês vão descobrir que partículas de tamanho menor entregam uma eficiência maior na separação

cromatográfica mas eu tenho algumas restrições com a diminuição do tamanho de partícula Então não é porque uma coluna sub 2 micrômetros entrega uma eficiência muito grande que eu vou sair utilizando ela em todos os hplc ou plcs por aí até porque colunas sub 2 micrômetros não são utilizadas no hplc né eu tenho um problema tem a aula quatro se eu não me engano ou cinco eh eu tenho uma aula de diferenças entre hplc e o PLC e lá a gente fala do por você não pode utilizar uma coluna de uplc em um hplc ou Orlando

Maravilha ó usa colunas de 5 micrm 1.7 3.5 Opa é uma variedade bem grande aí e bem boa para vocês e utilizarem convido vocês pessoal que tá aqui comigo até esse momento para aproveitar cliquem aqui ó no no botãozinho de curtir do do vídeo e também se inscreva no nosso canal isso ajuda muito a gente a continuar aqui fazendo esses vídeos para vocês tá bom Seguindo aqui com o nosso hplc já falei de fase móvel já falei de bomba cromatográfica já falei de injetor já falei de forno de colunas já falei da própria coluna e

seus componentes e o que que eh faz a condução da nossa fase móvel os nossos conectores e as nossas tubulações parece algo que a gente sempre vai não dar importância para isso fala cara mas as tubulações tem tanta influência assim os conectores têm tanta influência assim digo para vocês que tem pode ter um impacto muito grande por eles são responsáveis pela vedação das tubulações os conectores E além disso dependendo do tipo de tubulação que você tem você pode ter uma dispersão dos seus componentes internos eh suficiente para não ter uma cromatografia bem feita Então se

atentar para Qual é a tubulação Qual é a dimensão da tubulação Qual é o tamanho da tubulação se ela aguenta ou não pressão também é importante então fiz questão de manter um slide aqui pra gente falar sobre tubulações tá o que você deve saber para garantir funcionamento adequado desse dessa parte do equipamento os volumes internos das tubulações que conduzem a fase móvel influenciam no alargamento de bandas cromatográficas que consequentemente irá influenciar na separação composição de material das tubulações os mais comuns acid inoxidado que aquela tubulação de metal que você precisa usar chave para poder fechar

ou então materiais poliméricos Como pique Ou poquet você só encontra esses dois materiais aqui e em tubulações depois da coluna cromatográfica e não antes dela por as as pressões depois da coluna cromatográfica são menores na verdade você não deveria ter uma uma pressão muito alta depois da coluna cromatográfica tá Tod as tubulações antes pode reparar no seu hplc elas são de aço inoxidável antes de chegar na coluna caso elas sejam de material polimérico você precisa ter parafusos adequados para aguentar a pressão antes da coluna Então não é tão simples assim de você ter alguma tubulação

anterior tá tubulações parafusos originais devem ser preservado Sabe aquela história de você chegar e pegar uma tubulação do do hplc que tá do lado né hoje a gente tem sabe que tem inúmeras indústrias com vários hpcs às vezes um do lado do outro aí tem um hplc de Um fabricante que tá parado e você vai utilizar um hplc de outro fabricante que tá por ali você vai lá e pega a tubulação de um e coloca na outra galera você pode tá acabando com o seu método cromatográfico porque o diâmetro interno dessa tubulação e até as

conexões pode não ser adequado pro seu hplc então a atenção com isso também é necessário para você ter um o método adequado no momento de Executar a sua análise cromatográfica tá se atentem para isso não menos importante detectores a função do detector é transformar o sinal da fase móvel e das moléculas em dados que possam ser coletados no computador então depois de bomba injetor forno de colunas colunas cromatográficas você precisa ter um detector para poder captar a as moléculas que estão chegando lá lá na evolução da cromatografia inclusive o choma tips que vai ser liberado

lá quando você baixar o link da da aula você preencher o formulário você vai receber um documento que fala da evolução da cromatografia e nessa evolução da cromatografia vocês vão perceber que ah na origem da cromatografia você não conseguia ter uma detecção muito adequada você nem tinha uma cromatografia muito adequada só que era uma detecção visual então a separação por classe de moléculas era por cores e é até esse motivo a origem do nome cromatografia né uma separação baseada em cores hoje quando a gente pega os métodos cromatográficos e a análise baseada em em detecção

micro detecção muito pequena você não tem eh uma maneira de det detectar de uma maneira visual E para isso foi desenvolvido alguns detectores os mais mais comuns e mais conhecidos difundidos aqui com eh de vocês são os detectores UV ou PDA mas eu tenho também detectores direcionados paraa detecção Universal que é o caso do índice de refração muito utilizado na detecção de açúcares muito utilizado na detecção de polímeros detectores de fluorescência detectores por espalhamento de luz analisadores de massa ah detectores amperométrica série de detectores diferentes com aplicações específicas para cada classe de moléculas hoje a

gente não vai falar sobre isso eu queria trazer alguns exemplos para vocês aqui do que vocês têm na mão a escolha do detector na análise cromatográfica está alinhado com a capacidade da molécula de ser detectada então para você selecionar um equipamento adequado Você precisa olhar primeiro pra sua molécula e ver a capacidade dela detecção ou por ultravioleta ou então na região do visível no caso dos detectores UV e o PDA ou então a seleção de outros detectores aqui tá Caso vocês queiram se aprofundar nesse tema fique comigo aqui pras próximas aulas que a gente vai

chegar em detectores tá ou se você estiver muito ansioso nós temos as aulas aqui do cromatografia eh hplc com propriedade que você pode se inscrever que tá aqui na tamb também do YouTube tá você pode procurar os links aqui embaixo tá a Concentração da molécula de interesse também influencia na escolha do detector Correto isso é muito eh Evidente tá por dentro né Se a gente fosse viajar por dentro de um detector né aqui vocês estão vendo um exemplo de um detector por fora em que a sua fase móvel ela vai chegar aqui nessa tubulação que

você tá vendo vai passar por uma célula de detecção e baseado em um Ah uma capacidade de eh de direcionamento de feixe de luz através dessa célula de detecção você consegue dizer no caso do UV ou do PDA se a célula tem se a a sua molécula tem alguma absorbância ela num sinal elétrico ou não então por dentro quando a gente viaja por dentro de um detector ou Isabela mandou aqui que aula sensacional obrigado Que legal que você tá aqui acompanhando também a gente tem né olha só aqui dentro do hplc a fase móvel passando

por uma câmara então Imaginem só aqui a fase móvel passando e indo pro descarte então fase móvel passando mas eu tenho feixe de luz passando através da célula de detecção e a combinação desses eh de toda essa parte Ótica gera para mim um sinal elétrico que pode ser convertido em um cromatograma tá funções básicas e informações básicas de um cromatograma tá Por que que eu tenho né antes de mais nada um cromatograma eh primeiro que o sinal elétrico do detector ele precisa ser convertido de Fato né em um cromatograma pra gente ter um nível de

detecção ou de quantificação de uma determinada molécula então todas as vezes que você tem o start da injeção no momento da injeção o seu computador e o seu software começa a captar o sinal do detector via de regra esse detector ele tá zerado o sinal dele e o meu gráfico que é chama-se cromatograma começa a ser gerado então eu tenho uma captação por tempo e intensidade desse sinal no meu detector todas as vezes que eu tenho a chegada do volume Ou pelo menos da injeção que sai do injetor e chega no detector Eu tenho um

sinal chamado t0 ou volume morto todo o tempo ou todo o sinal que sai em que eu entendo como sendo meu pico cromatográfico quando eu pego do zero até a intensidade máxima desse pico eu tenho uma coisa chamada tempo de retenção essa nomenclatura ela é muito importante pra gente então hoje aqui eu vou passar todas as informações do que é um cromatograma e aos pouquinhos a gente vai destrinchando aqui o que que significa cada eh ponto aqui do cromatograma de fato tempo morto tempo de retenção eu tenho também que a área sob esse pico ela

é proporcional à minha concentração então quando eu tenho uma área sob a curva proporcional à minha concentração eu consigo quantificar essas moléculas tá então baseado nessa área aqui eu consigo dizer e determinar eh qual é a concentração Possivelmente dos meus analitos da linha de base até o ápice desse pico cromatográfico eu tenho a altura do pico cromatográfico eu posso quantificar as moléculas baseado na área ou baseado na altura desse pico cromatográfico a área é mais comummente utilizada porque ela tem uma precisão ou tende a ter uma precisão muito maior do que o pico cromatográfico e

a diferença de tempo de retenção à meia altura desses Picos eh traz para mim uma resolução entre Picos tá essa é a nomenclatura básica de um cromatograma tá existem muitas outras informações que a gente consegue tirar de um cromatograma mas para introduzir as informações sobre cromatografia e hplc é importante que você tenha muita clareza dessa nomenclatura aqui tá Depois a gente vai para um passo um pouquinho mais avançado pessoal Olha só pra gente já tá se encaminhando aqui pro final Então antes de falar a palavra-chave de fato queria trazer para vocês o que é mais

é importante no nosso hplc tá Ah um princípio básico da cromatografia líquida é que a amostra serja solubilizada na fase móvel certo isso isso olho pra minha molécula vou desenvolver o método por ela a primeira coisa que eu que eu vejo ela é solúvel na minha fase móvel se ela não for solúvel eu não consigo desenvolver a cromatografia líquida ponto eu preciso ver uma alternativa tá e existem outras alternativas de determinação e quantificação de moléculas sem ser cromatografia líquida então eu olho primeiro para isso é solúvel tá vai ter uma maneira para se fazer cromatografia

líquida as aplicações de hplc são as mais diversas a técnica está presente nos mais diferentes Ramos da ciência desde determinação de moléculas em alimentos até determinação de fármacos na corrente sanguínea de pacientes por exemplo dentre outras inúmeras aplicações ambientais por exemplo determinação de pesticidas em Águas superficiais Ah há muitas vantagens no uso do hplc como técnica de separação como seletividade precisão sensibilidade robustez flexibilidade também entre outras mas Nem tudo são flores trata-se de uma técnica complexa que demanda tempo de aprendizado e também muita mão na massa onde mais eu encontro informações sobre hpci galera eu

queria deixar uma mensagem antes de mais nada aqui para vocês que é a seguinte eh para aprender hplc e ter sucesso essa carreira você precisa ter muita resiliência Então não vai ser com uma semana de uso talvez não vai ser com um mês de uso talvez não vai ser com se meses de uso do hplc que você vai entender todos os detalhes de fato Você precisa acreditar que é uma técnica complexa e para você ter domínio para você virar um analista sor você precisa investir bastante na sua carreira para quem tá aqui até agora escutando

E todos esses passos e vai est na próxima aula com o Bruno e vai est na próxima aula de colunas cromatográficas comigo você acredite você tá à frente de muita gente porque você tá investindo no seu conhecimento busque conhecimento também pessoal é uma das fontes mais ricas de conhecimento em LC são os sites dos Fabricantes então entrem lá por exemplo no site da Wats e procurem é técnica de cromatografia por GPC por exemplo lá pessoal tem uma explicação muito vasta de como funciona a separação por cromatografia de permeação em gel por exemplo que é esse

exemplo que eu acabei de dar aqui para vocês dentre outras inúmeras eh informações que você pode adquirir lá de especificação de de equipamento especificação de coluna e direcionamento evidente que livros artigos eh é uma fonte riquíssima também de informação Então você ter os livros direcionados eh de cromatografia líquida é super importante então a gente tem muito conhecido né o livro da Carol Collins é uma indicação mas tem um outro para você que quer se aprofundar mais que é o livro do sneider depois vou deixar lá no nosso chroma no nosso Instagram algumas informações sobre onde

você encontra essas informações tá E aqui no chroma evidentemente comigo com o Bruno com o restante do time da Matrix você vai encontrar muita informação sobre a cromatografia também tá fiquem com a gente que vem muita informação por aí tá hoje é essa aula e os documentos que você pode baixar quando você preencher o link do formulário você vai receber aí os documentos para entender um pouco melhor sedimentar a informação sobre cromatografia eh esse slide aqui pessoal queria frisar essa informação sabe hplc é uma construção e nós estamos aqui para eh seguir essa jornada junto

então hoje foi só a aula um temos aí Aula dois aula três aula 4ro aula 5 e assim vai aprendizado contínuo é o que define a cromatografia vai ter às vezes 20 anos 30 anos aí de cromatografia vai ter coisa nova que vai surgir tá eh o André tá falando aqui alguma coisa determinação de cafeína Ah bom já eu eu pego aí alguma alguma informação para vocês porque a gente tem um slide aqui só de de perguntas então fique à vontade para para mandar aí todas as informações tá vocês são os nossos convidados para próxima

aula então antes de falar para lava chave dessa aula aqui Não deixe de assistir a próxima aula que é de CG do Bruno que vai acontecer na semana que vem fiquem ligados no nosso no nosso canal do Instagram que lá a gente vai divulgar todas as informações de dia e horário e e acompanhe aí todo o time tá façam parte aí do nosso grupo do chroma do Whats e também do telegram que tá aqui na descrição só clicar no link e caso você queira informações mais aprofundadas tem o curso de hplc com propriedade por diferentes

módulos então módulo inicial Passa e te leva desde a parte mais básica passando por todos os componentes de hplc aula de química da cromatografia Passos desenvolvimento de método e vai vai longe essas informações Com certeza você vai ficar muito eh com muito conhecimento em cromatografia caso você façam só o módulo um do curso de hplc com propriedade Aí caso você queira algo mais avançado da parte de resolução de problemas nós temos o módulo dois e o módulo três vocês encontram aí também tá hã palavra-chave antes de passar aqui paraas nossas perguntas Quem ficou com a

gente até agora aí que satisfação muito grande muito bom ter vocês aqui antes de abrir para para perguntas aqui ô Carol salve muito bom valeu a força antes de falar a palavra chave daqui a pouco vai abrir aqui para perguntas então fiquem à vontade aí para mandar eh a as perguntas de vocês tá palavra-chave dessa essa aula pessoal anotem aí para vocês preencherem o link de uma maneira adequada e tem que tá correta essa palavra lá tá senão em respeito a Quem acertar a palavra a gente não vai enviar o certificado para vocês tá então

coloquem lá preenche formulário adequadamente escrevam uma palavra eh que é conhecimento de novo repetir aqui para vocês a palavra é conhecimento conhecimento porque vocês que estão acreditando em vocês e investindo em conhecimento acreditem que o trabalho devolve e que o conhecimento devolve também então se você tá aqui até agora com certeza você tá agregando muito aí na sua na sua vida beleza palavra-chave de novo conhecimento tá obrigado vocês que estão aqui até agora vou abrir para vocês para pergunta quem quiser mandar uma pergunta agora fique à vontade Talvez seja o momento e vocês perguntarem eu

posso ajudar vocês com alguma dica com alguma informação e caso vocês não tenham nenhuma pergunta eh também foi ótimo est aqui com vocês foi super Super agradável aqui cadê o link o Alex tá perguntando Alex ó se você entrar na descrição da aula lá embaixo a última o último link da descrição é o link eh que você deve preencher tá e você vai clicar no link ele vai abrir um formulário lá você tem que preencher o formulário colocar seu nome adequadamente responder as outras perguntas e lá por último você vai colocar a informação de que

de qual é a palavra-chave tudo bem Deixa eu aproveitar aqui enquanto vocês estão perguntando a minha Alexa resolveu ligar aqui sem do nada Então deixa eu pedir PR ela desligar aqui tá que ela tá na sala aqui Alex para aí pronto Maravilha Ah que legal pessoal obrigado aí pelas felicitações pelos parabéns Caso vocês tenham alguma a Michele mandou aqui Michele Muito obrigado sou fã de vocês que legal mich muito obrigado por esse feedback Fantástico tá Fantástico a gente fica muito feliz com isso tudo tá com esse esse engajamento de vocês né com as ações que

que são feitas em conjuntos com vocês e o objetivo do cromac é difundir conhecimento né O cromac um canal criado eh Para difundir conhecimento sobre cromatografia a gente tem maior satisfação em em estar junto com vocês discutindo aprendendo junto eh pegando todos os detalhes eh sobre métodos cromatográficos e desenvolvimento que é super legal assim a gente aprende muito na verdade sempre foi foi uma troca né entre cromac e e usuários né de da da cromatografia nunca foi só eh passagem de de conhecimento tá é para isso que a gente tá aqui eh agradeço novamente as

os passos que vocês passaram né né de de aula excelente e tudo mais nós temos a próxima aula sobre CG e o que ele é o o que que de fato é um CG né como que ele funciona depois de CG e o que ele é a gente vai falar sobre colunas cromatográficas tá então assim ó para você que quer aprender mais sobre colunas Como selecionar uma coluna cromatográfica e como desenvolver um método como diferenciar um hplc de um uplc como analisar no detalhe por exemplo vitaminas como analisar pesticidas fique aqui no nosso canal se

inscrevam que vocês vão aprender muito aí eu tenho certeza a gente vai trocar muita informação o Eduardo perguntou aqui se a aula vai ficar disponível no canal sim a aula vai ficar disponível no canal e assim ó 24 horas para quem encher o os detalhes do link né o formulário de uma maneira adequada com a palavra adequada depois de 24 horas não vai ser mais possível eh receber o certificado aos que que preencher de uma maneira adequada a gente vai enviar o certificado de participação dessa aula aqui combinado Maravilha pessoal eh que legal ítulo obrigado

pelo feedback também eh Maravilha tivemos algumas aulas aí aí no passado também né e a gente espera ser cada vez mais assertivo com vocês combinado galera tá aqui os nossos contatos quem se sentir eh à vontade para escrever pra gente a gente pode trocar mais algumas informações aqui né a gente tem o e-mail tanto da Matrix quanto do atendimento do chroma do qual a gente pode responder com eh tirando algumas dúvidas específicas sobre cromatografia sobre um método sobre uma seleção de coluna sobre uma seleção de um solvente mais adequado aqui para vocês fiquem à vontade

para se conectar conosco tá obrigado ítulo deixou o like aí fica aqui nossos agradecimentos a todos vocês que que acompanharam a aula Pessoal lembrando curtam o vídeo compartilhe com quem vocês acreditam que pode se interessar também sobre cromatografia vai ser muito bem-vindo tá beleza eu fico por aqui saudações um abraço até a próxima aula