Testes Imunológicos

o olá pessoal bom estamos constantemente ouvindo falar em testes de m positivo para com 2019 o que o paciente apresentou como resultado da sjc negativo e esses diagnósticos são usados constantemente se são muito importantes só que permitem confirmar a infecção da presença de antígenos ou até mesmo de rastros deixados por ele ao entrar em contato com o nosso sistema imune sendo assim em nossa aula de hoje estudaremos os testes de imunodiagnóstico começaremos conversando sobre as características nas quais se baseia um esse espécies e entraremos posteriormente em detalhes de alguns dos testes imunológicos mais utilizados então

vamos lá as técnicas de imuno diagnósticos são testes que determinam respostas imunes de anticorpos antígenos ou linfócitos para detectar de forma exata a presença as dores dentro do organismo este espécies se baseia na interação entre antígeno e anticorpo de forma que nós podemos manusear como reagente tantos anticorpos propriamente dito como os antígenos e os seus componentes tendo que para detectar anticorpo nós iremos utilizar como reagente os antígenos enquanto que para detectar os antígenos nós iremos utilizar os anticorpos desta forma nós podemos concluir que os testes semana diagnósticos baseia-se no princípio da especificidade da resposta imune

cada método apresentará as suas características suas aplicações e limitações próprias vale considerar que dois critérios extremamente importantes para a escolha de um método é baseado em sua sensibilidade e sua especificidade um método será considerado o mais sensível quanto é só a concentração de anticorpos ou antígenos ele for capaz de detectar ou seja quanto menos sensível tece maior a probabilidade de deixar de detectar anticorpos antígenos em concentrações baixas e consequentemente maior será a probabilidade de obtenção de resultados falso-negativos sendo assim a sensibilidade nos informa o quanto teste é bom para identificar os indivíduos com a doença

além da baixa sensibilidade de um teste outras circunstâncias que podem nos gerar resultados falsos negativos eh no período de janela imunológica que aqui para a pena chamarmos atenção esse período de janela imunológica nada mais é que o tempo em que você teve o contato com determinado antígeno e começa a produzir níveis detectáveis de anticorpos contra aquele determinado tá bom entendido a sensibilidade à especificidade de um teste é dita como a probabilidade de um teste dar negativo quando o indivíduo não tem a doença em minas gerais podemos imaginar uma situação para entendermos melhor esses termos vamos

hipotetizar um teste diagnóstico que eu quero validar se ele é ou não um teste sensível e específico bom nessa tabela 2 por dois nós podemos exemplifi car uma doença qualquer tipo assim nós pegaremos pacientes doentes e não doentes conhecidos no qual iremos aplicar esse teste e assim nós vamos conseguir avaliar a sensibilidade ea especificidade pensando em uma população então de 200 pessoas sabemos que sem são doentes e sem não são doentes dentre os doentes 90 pessoas e eram seu teste positivo porém dez pessoas tiveram seu teste negativo agora aplicaremos esse teste dentre os indivíduos saudáveis

e nessa situação 90 pessoas realmente tiveram seu teste negativo porém dez pessoas receberam o resultado positivo para o teste assim teremos os verdadeiros positivos os falsos negativos ainda nós teremos os não doentes que receberam os testes positivos nosso chamaremos de falso-positivo e os não doentes cujo teste deu negativo teremos os verdadeiros negativos para avaliar a sensibilidade de um teste o que podemos fazer é pegar o valor dos verdadeiros positivos e dividir pelo valor total de doentes ao passo que a especificidade nós pegamos o e ao de verdadeiros negativos e dividimos pelo total de não doentes

nesse exemplo teríamos noventa porcento de sensibilidade e noventa porcento de especificidade para este teste diagnóstico porém é válido destacar que esses valores não são fixos para cada tércia quando você tem um teste diagnóstico para você determinar quem é doente ou não você precisa determinar a partir de qual ponto aquela pessoa é considerada doente ou considerada saudável portanto existe a necessidade de se estabelecer pontos de corte ou katoff para cada técnica ou seja os títulos por exemplo a partir dos quais os resultados positivos indicam a presença de anticorpos específicos assim essas pessoas são positivas ou negativas

e vale também chamarmos atenção nesse ponto é que o chamado valor preditivo de um teste mu no diagnóstico indica seu grau de precisão e depende exatamente da sensibilidade e da especificidade do método utilizado o valor preditivo do método será melhor quando sua sensibilidade especificidade se aproximarem de 100 porcento bom como tá agentes infecciosos compartilham sequências antigênicas entre si determinado antígeno utilizado em um teste no diagnóstico pode apresentar reatividade cruzada com anticorpos induzidos por outros agentes infecciosos a ocorrência dessas reações cruzadas pode dificultar a interpretação dos testes porém o teste sempre apresentará a títulos mais elevados

para anticorpos específicos para o antígeno do que para os anticorpos e antes de reatividade cruzada em linhas gerais nós costumamos afirmar que determinada o teste positivo corresponde a uma infecção atual recente é através da elevação do título de anticorpos da classe igg e me jackass imunoglobulina é a que mais aparece precocemente após o primeiro contato com o antígeno e a que mais cedo desaparece da circulação após cessado o estímulo antigênico isso devido a sua curta meia-vida já títulos elevados de g ocorrem mais tardiamente e podem permanecer positivos por anos após a infecção dentro desse contexto

são vários os testes imunodiagnósticos que são capazes de detectar seja dmz por exemplo nós temos elisa imunocromatografia imunofluorescência western blot aglutinação enfim entraremos com d e tem alguns deles na aula de hoje eu tenho dúvida que você já ouviram falar dos testes de elisa começaremos por ele o elisa ou ensaio de imunoadsorção enzimática é um teste imunoenzimático que permite a detecção de anticorpos específicos esse é um teste usada no diagnóstico de várias doenças que induzem a produção de imunoglobulinas ainda assim o teste baseia-se na interação de antígenos e anticorpos geralmente o elisa realizado em placa

com 96 poços e pode ser feito com inúmeras modificações do procedimento básico para entender melhor como esse teste funciona nós vamos analisar o que acontece em um desses postos nessa placa de ensaio em um tipo denominado elisa indireto para realizar o ensaio os povos são revestidos com os antígenos de interesse assim os postos vão ser preenchidos o soro de paciente que podem inclusive ser colocados em diferentes diluições assim se houver a presença de anticorpos contra o antígeno eles irão se ligar aos antígenos fixados no fundo do poço mas apenas os anticorpos específicos se ligarão os

posição então lavados para remover aqueles anticorpos que não se ligaram e em seguida é adicionada uma solução contendo um anticorpo contra os anticorpos por exemplo podemos adicionar um anti e gg que irá se ligar aqueles anticorpos que se ligaram aos antígenos e sente corpo o que pode ser covalentemente conjugada a uma enzima posterior lavagem para remoção de qualquer anticorpo conjugado que não se ligou irá interagir com substrato cromogênico em que a interação entre o substrato ea enzima conjugada ao 2º ano e gerará uma cor visível que pode inclusive ser quantificado pelo leitor de placa eletrônico

dessa forma a característica marcante do elisa indireto é a utilização de anticorpos secundários para o maior nível de especificidade do teste um outro tipo de elisa que também vale a pena chamar-nos a atenção é o elisa sanduíche se que é assim chamado pois uma notícia não fica entre dois anticorpos o de captura e o de detecção e é utilizada por ser robusto e sensível ao mesmo tempo nesse tipo de elisa primeiramente estão ligados ao fundo da placa do tece os anticorpos de captura impedindo que haja outros pontos de ligação forte para os antígenos a seguir

é adicionada a amostra de interesse e caso exista antígeno específico procurado esse se ligar aos a captura seguida é feita uma lavagem para retirada de antígenos que não se ligaram nos anticorpos de captura e posteriormente são adicionados à mostra os anticorpos específicos ao antígeno realizamos uma nova lavagem e adicionamos o anticorpo conjugado a enzima é feito uma segunda lavagem para retirada dos anticorpos conjugados que não se ligaram à mostra e por fim é adicionado substrato que irá reagir com enzima promovendo a mudança de cor já o elisa chamado elisa direto corresponde ao procedimento básico do

elisa ou seja não iremos observar a utilização de anticorpos de captura por exemplo basicamente corresponde as etapas de edição de amostra tamponada a placa de teste posterior adição de um anticorpo primário acoplado a enzima e adição de substrato cromogênico tá bom entendido o princípio básico de alguns testes de elisa vamos agora entrar nas imunocromatografia se os testes que utilizam essa metodologia são conhecidos popularmente como testes rápidos são testes facilmente executados que podem ser feitos fora do ambiente laboratorial e que não precisam de reagentes adicionais o que acontece é que ao adicionarmos uma amostra teste por

exemplo sangue que normalmente vem junto com um tampão essa mostra irá percorrer por todo o aparato normalmente por uma membrana de nitrocelulose com isso ela encontrará com anticorpos conjugados normalmente com ouro coloidal que fornece a coloração vermelha na fita ainda nós teremos a presença de um antígeno fixado e um anticorpo fixado assim você temos a presença de anticorpos o riscos na mostra os anticorpos ao passarem na região se associam a essas imunoglobulinas que são anticorpos ao se associarem na presença do ouro coloidal nos fornecer a linha vermelha o excesso de anticorpos migram e se associam

a segunda linha e essa linha que nos fornece o resultado de controle que é o controle da reação assim teremos um teste com o resultado positivo quando a linha até se a linha controle foram positivas como resultado negativo nós temos apenas o aparecimento da linha controle já um teste inválido é quando só linha teste positivo aparece ou nenhuma tendo necessário a repetição deste teste já imunofluorescência é usada na pesquisa tanto de antígenos quanto de anticorpos a fazer assim na capacidade dos anticorpos conjugar em si a fluorocromos que são detectados através da microscopia de fluorescência logo

eu preciso de um microscópio de fluorescência e essa é uma limitação de se fazer imunofluorescência em laboratórios de rotina além disso é difícil a padronização de laudos da doença nós temos dois tipos de imunofluorescência direta e indireta na direta em que pesquisamos na amostra do indivíduo o antígeno iremos adicionar um anticorpo conjugado com alguns urocromo e levamos para o microscópio para fazer a identificação desta reação já nem direta nós temos um antígeno fixado em uma fase sólida normalmente em uma lâmina adicionamos a amostra do indivíduo que queremos pesquisar e se tiver a presença de um

anticorpo e sempre corpo se ligará ao sistema em seguida adicionamos um anticorpo que esteja conjugado ao fluorocromo esse sistema novamente é levado ao microscópio para fazer a análise existem ainda algumas técnicas de imunodiagnósticos que utilizam reagentes não marcados em que a ligação do anticorpo altera o estado físico do antígeno por exemplo nós temos a técnica de soroaglutinação rápida em placa é um método sociológico mais simples e comumente utilizado sua realização é efetuada em uma superfície de vidro podendo ser uma placa específica para o teste ou lâmina simples o teste efetuado com adição de uma gota

de um antígeno e uma gota de amostra de soro sobre esta superfície esse material deve ser homogenizado e a leitura pode ser realizada a olho nu ou com a ajuda de lentes e incidência de luz casa a anticorpos específicos aglutininas no soro irá ocorrer a formação de grumos ou floculação formada pelo complexo antígeno-anticorpo a presença desses grupos é indicativa de que o soro possui anticorpos específicos para reagir com o antígeno utilizado esse teste ao método sensível quantitativo porém apresenta baixa especificidade devido à presença de fenômenos como reações cruzadas então pessoal são várias as técnicas de

imunodiagnóstico da disposição nós conversamos sobre alguns métodos laboratoriais suas interpretações mais estejam cientes que esses são alguns exemplos utilizados dentre todos os que possuem como base essa interação entre os antígenos e os anticorpos podemos conversar sobre outras técnicas em um outro momento no mais vou ficando por aqui até a e aí