#2 HPLC Modo isocrático - Cromatografia Líquida - CLAE - Aula animação 3D. Separação real!

nesta animação 3d iremos ver como pode ser feita a separação de 3 analíticos contidos em um fármaco a idéia é determinar para acertar mall cafeína ea estão sentindo salicílico em comprimidos analgésicos observando a estrutura dos três analíticos e buscando por propriedades físico-químicas disponíveis na literatura concluímos que há nas moléculas ligações duplas conjugadas isso indica que estas espécies absorve radiação uv e que eu posso adotar o detector espectrofotômetro para as medidas um problema porém é que é muito provável que estas espécies absorvam radiação em regiões similares do esperto por isso há de se separar estes analitos

antes da detecção vemos ainda que além de facilmente polariza weiss estas moléculas apresentam grupos que permitem interações intermoleculares fóruns como o de colo de pólo e ligações de hidrogênio estas características resultam em baixa pressão de vapor e direcionam a separação para métodos em fase líquida agora se obtivermos os coeficientes de participação octanol água veremos que a maior afinidade destas espécies pela fase orgânica assim se obtivermos um mapa de potencial eletrostático dos três analíticos veremos regiões de maior concentração de carga o indicado em vermelho azul mães veremos também que em cada uma das moléculas uma posição

diferente em verde indicando uma região entrou fóbica e justificando afinidade por uma fase orgânica devido a isso será utilizado uma coluna preenchida com fase estacionária também hidrofóbica neste casos e 18 como irei utilizar uma fase móvel composta por metanol e água ou seja uma fase mais popular que a estacionária a separação será realizada então em modo de fazer reversa abrindo o software de controle podemos ver que eu já deixei o equipamento ajustado para vazão de 1 ml por minuto a composição da fase move foi ajustada para 40% de fasear ou a água empregadores e meio

e 60% de metanol disponível no canal b já as fases e de não serão utilizadas nessa separação e por isso foram ajustadas para 0% o detector eu estou ajustando agora para 230 no metros ea temperatura do forno em 30 graus celsius já o tempo de análise foi ajustada em dez minutos de corrida para o primeiro teste eu preparei uma solução padrão que contém os três analistas solubilizado na própria fase móvel irei colocar este vaio no interior do inventor automático abrindo a aba do software para o início da corrida podemos então editar o padrão e ver

o que acontece o frasco contendo solução padrão foi colocado na posição 11 vetor automático quanto ao volume de amostra irei trabalhar com cinco microlitros escolhendo então o nome do arquivo em pasta podemos iniciar a separação nem retorno automático queremos que a agulha está aspirando padrão e ou introduzindo no percurso analítica já no software de controle temos acesso aos dados referentes a esta separação do lado direito estão os parâmetros de corrida como vazão pressão e outros na parte inferior temos acesso aos dispositivos que acompanhou hplc como os reservatórios de onde a fase móvel está sendo puxada

bomba de solventes injetor automático forno onde está posicionada a coluna e também o detector já neste gráfico temos o sinal de absorver balança do detector sendo pilotado em função do tempo ou seja o cronograma no início da corrida ao solicitar que o sinal seja apresentado de forma amplificada vemos apenas alguns ruídos na linha base após algum tempo porém é possível notar que os primeiros picos aparecem e depois de pouco mais de cinco minutos o terceiro pico registrado ea separação é terminada no final são apresentados os picos para os três analisados injetados como vocês podem ver

paracetamol cafeína e ácido acetilsalicílico foram completamente separados isto é apresentar ou separação de linha base em tempo pouco maior que cinco minutos é preciso citar também que toda a corrida foi realizada com composição de fazer móvel fixa ou seja e modo socrático de análise espero que vocês tenham gostado e que também assistam os próximos vídeos e sugestões dúvidas e críticas construtivas são bem vindas por favor deixem seus comentários [Música]