IMUNOLOGIA - Aula prática de ELISA (parte 2)

e continuando Então a nossa frequência da técnica Lisa é nós tínhamos parado no momento que eu coloquei para incubação É nos potinhos o substrato cromogênico eu não tinha falado para vocês qual era o substrato cromogênico né é um substrato é O peróxido de hidrogênio e o cromogeno eu tmb tetrametilbenzidina tá então deu 20 minutos vocês vejam que já tem aqui a formação de cor mais o Elisa a gente consegue né relacionando né Quanto mais intenso a gente consegue relacionar com a de horta densidade óptica Então a gente vai ver depois do quanto de cor né

Que olhando aqui eu vejo que tem postos mais coloridos outros menos né mas quando a gente faz a leitura da absorbância ou seja E aí Ótica a gente consegue ter um valor numérico dessa intensidade de cor Lembrando que quanto mais colorido for esta cavidade mas exige Mustang nos torno dessa pessoa tá é aí tapa agora não é fazer a lavagem etapa agora é a gente utilizar um tampão de parada que o ácido uma solução de parada que é o ácido clorídrico é o que ele chama de estoque Então vou colocar sem micro litros dessa solução

de parada Em Cada poço e depois a gente vai ver que e essa cor azul vai para a cor amarela é na sequência deixa eu já fazendo então na sequência a gente vai fazer a leitura e no leitor de Elisa e a 450 na moto certo então aqui tá o meu E aí Olá aqui é o meu tampão de parada né o ácido clorídrico Na verdade vou colocar agora sem micro litros tô em casa pô sim bom então volume final quem será 200 micro litros Em Cada poço em cada furo Ah e não teremos 15

minutos e para fazer leito então quando a gente planeja fazer Lisa a técnica utiliza tem que estar tudo funcionando tá então eu vou acabar de preencher aqui nós vamos levar então no espectrofotômetro que eu tô chamando que a leitura de Elisa e nós vamos fazer a leitura dessas absorvam antes desta tensidade Ótica calibrando o aparelho a 450 nanômetros Tá ok a recomendação e do fabricante na no kit da do fabricante do kit é que a gente não tratasse 15 minutos E desde a colocação aqui na solução de parada e até e a leitura no aparelho

aqui gente é muito importante que a gente não passa bolha que isso atrapalha leitura tão nesse momento aqui tem que ter bastante cara fé e não a gente vai atrapalhar a gente vai prejudicar a leitura da placa bom então reforçando com vocês a técnica ele esá na técnica Elisa existe essa geração de cor o quanto mais intensa cor mais existe em quantidade aquilo que eu tô procurando no caso é a LG tá é a gente poderia simplesmente fazer uma leitura qualitativa não é quanto mais colorido quanto menos colorido Pocinho Mas é interessante fazer o que

eu vou fazer que é colocando aparelho no espectrofotômetro que eu chamo de leitora de Elisa para a gente poder ver cada amostra de cada Pocinho a de absorbância até a cidade óptica Tá ok então vou parar um pouco a gravação e já já retomo com vocês lá no outro laboratório não tá o leitor deles E aí bom então agora nós vamos fazer e a leitura das absorbâncias de estrada moto né que isso aqui é o espectrofotômetro leitor de Elisa já coloquei a placa que dentro o recheio aparelho aqui nós temos um programa que faz a

leitura né eu coloco ali Qual é a minha referência no caso a leitura é a 450 anônimos e essa parede então Tyler a densidade Ótica de cada assim ou seja o quanto de cor se formou em quando assim ele vai me dar então um dado numérico então isso não vai ser mais um valor subjetivo né ah eu acho que você tá mais escuro e se dá mais claro mas o quanto mais caro mais claro mais escuro então agora a gente vai ter um valor numérico e isso vai ser muito interessante que nós vamos conseguir construir

nesse caso um gráfico com aquelas aqueles controles e nós vamos depois inspire o valor da absorvância da até o e o nosso paciente obteve nesta leitura e a gente vai conseguir determinar a concentração de G do sobre esse paciente então aqui a gente vai relacionar absorbância como concentração de G então primeiro eu vou pedir eu tenho aqui instalado nesse a fazer sem computador um arquivo e toda a leitura que estiver aqui vai aparecer para mim aqui na tela computador tá eu vou pedir para fazer a leitura E aí e ele pediu para colocar a placa

no leitor eu já tinha colocada E ele fala quando estiver em posição tá tá ok então vou dar um ok abertura está e em Progresso e não dá para ouvir E aí E aí E lembrando que aquela conformação que eu falei lá no início do vídeo A1 A2 era aquele que ele controle que não Tinger é depois de um número dois são todas a todo tudo aquilo que está na placa aquelas cavidades né que eu falei para vocês que lembrava a batalha naval exatamente tem que tá aqui eu já vi esse vocês olharam aqui tem

um 96 furos tá o que já falei pronto então eu tenho eu vim aqui antes e programei nesse programa O que seria tratada possível então eu já coloquei a questão os controles a questão os meus os meus outros testes tá então tudo que tiver aqui no posto aqui na placa eu tenho que reproduzir aqui é um nesse problema tá Eu vou e vocês perto que é melhor E aí [Música]