Microbiologia: Aula 6 - Microscopia de contraste de fase

E aí rapaziada beleza pura com todos vocês na nossa sexta aula do curso de microbiologia ainda falando das microscopias vamos entrar na microscopia de contraste de fase que é um pouquinho mais difícil em relação às duas outras microscopias que nós vimos nas aulas anteriores então nessa aula a gente vai com um pouquinho mais de calma pra gente definitivamente entender como funciona a microscopia de contraste de fase então especificamente nessa aula a gente vai dar um pouquinho dos conceitos gerais do uso da micr Utopia de contraste de fase Vamos mostrar como ela funciona nessa parte a

gente vai trabalhar bem com os detalhes de funcionamento e por fim falar das aplicações que essa microscopia tem que é uma aplicação muito útil a gente vai ver no final dessa aula então vamos começar aqui falando o seguinte a gente tinha visto então os mecanismos de funcionamento e as aplicações do microscópio óptico e microscópio óptico de Campo escuro pra gente conseguir visualizar as amostras nestes dois microscópios as amostras precisam estar fixadas muitas vezes precisam estar coradas só que o fato da gente fixar a amostra se for uma amostra biológica ela com toda a certeza vai

estar morta ela vai entrar no estado congelado e aí a gente vai ver a estrutura naquele instante em que a amostra foi fixada e muitas vezes nós desejamos observar os efeitos que aquela amostra tem no momento em que ela está viva ou seja o intercurso da da vida dela no microscópio e pra gente conseguir Observar isso daí a gente utiliza o microscópio de contraste de fase que nós colocamos a amostra para ser observada só que ela não vai ser fixada e essa amostra muitas vezes ela está viva isso não significa que nós não podemos olhar

também amostras que estão mortas Tá ok então a princípio a microscopia de contraste de fase permite a visualização com detalhes de amostras vivas e não coradas muitas vezes também quando nós coramos as amostras muitas vezes esses corantes eles são tóxicos para essas células e obviamente elas acabam morrendo então se a gente quer observar as amostras que estão vivas no microscópio nós utilizamos a microscopia de contraste de fase bom pra gente entender esse mecanismo de funcionamento do microscópio de contraste de fase Primeiro de tudo nós vamos ver quais são os componentes principais desse microscópio que também

são semelhantes aos dois outros tipos de microscopia que nós estudamos anteriormente que nós temos uma fonte iluminadora condensador lentes objetivas e oculares a diferença entre o microscópio óptico comum e Campo escuro em relação ao de contraste de fase é que nós temos próximo ao condensador um diafragma anular ou seja ele tem formato de anel e entre as lentes objetivas e oculares nós temos uma placa de difração que é para receber a luz que foi difratada esse processo a gente vai entender agora basicamente a microscopia de contraste de fase se baseia nos perfis das fases e

amplitude da luz para a geração de um contraste da imagem então a técnica o mecanismo pela qual o microscópio de contraste de fase funciona é baseando nos princípios que a luz tem vamos ver esses princípios basicamente essa figura nos mostra claramente esses princípios de amplitude e fase que a luz apresenta bom a luz nada mais é do que uma onda eletromagnética Então ela possui um certo comprimento e no vácuo a luz ela apresenta uma estrutura semelhante a essa que vocês estão observando ela é toda constante certo mas quando nós passamos a luz visível por alguns

objetos pode ocorrer certos fenômenos de alteração da luz que pode ser alteração da amplitude como alteração da fase o que que seria a amplitude é absorvermos a luz de uma superfície opaca e aí a amplitude ou seja o tamanho desta onda aqui ela fica diminuída veja que nós não alteramos o comprimento nós alteramos a amplitude Isso significa que o brilho que essa luz está emitindo é menor pelo fato aqui deste objeto ser mais escuro então quando a luz bate em um objeto escuro e continua como por exemplo um vidro opaco nós diminuímos a amplitude que

é a mesma coisa que diminuir o brilho daquela luz e aqui no caso da alteração de fase é quando a luz passa por uma outra região E aí nós alteramos a forma como que ela é percebida em relação a um outro plano O que que significa isso pra gente entender Vamos dar um exemplo clássico Se você pegar um copo com água e colocar um objeto no copo você vai ver que na interface entre o ar e a água a imagem ela sofre uma distorção parece que o objeto ele tá partido Mas de fato não está

porque houve uma difração da Luz essa difração é uma alteração de fase nós estamos observando dois planos o plano que tem o ar e o plano que tem a água e nós temos essa difração de fase o que que isso tem a ver com o microscópio de contraste de fase imagina o seguinte que você tem uma amostra viva extremamente delgada e você emite uma luz nessa amostra Você concorda comigo que se eu emitir essa luz na amostra ela vai dar contr contraste para nós muito baixo porque boa parte da Luz vai difratam luz que difratam

mostra então o contraste da amostra fica muito baixo e fica muito difícil de visualizar então quando a gente usa um microscópio óptico de contraste de fase nós utilizamos aqueles Anéis que ficam próximos aqui ao condensador e um pouco depois da lente objetiva o que que isso vai fazer bom Aqui nós temos dois Anéis condensadores que ficam próximos aqui à região que vai iluminar a nossa amostra Então nós vamos ter dois feixes de luz que vão passar pelo condensador Tá OK quando ele passa pelo condensador e focaliza na nossa amostra o que que vai acontecer como

a nossa amostra ela é muito delgada parte da Luz vai passar sem atingir a amostra e outra parte da Luz vai atravessar a amostra e vai refletir que é essa parte em amarelo essa parte em vermelho é a luz que não refletiu a luz que não refletiu é a luz que nós chamamos de luz de fundo se a luz de fundo não tiver junto a ela a luz que foi refletida Você concorda comigo que a visualização da imagem vai ser muito baixa o contraste da imagem vai ser muito baixo pois bem e aí o que

que acontece nesse microscópio óptico de contraste de fase nós temos esses Anéis que vão direcionar a luz refletida para a visualização da imagem Então veja aqui nós temos a luz que foi refletida menos 90º E aí a imagem que nós visualizamos né é o plano da imagem ela é sempre a somatória da luz de fundo mais a luz refletida se ela desvia e não vai até os nossos olhos a imagem de fundo é muito igual com a imagem que nós vamos Observar isso significa que o contraste vai ser muito baixo porque vai passar através da

amostra e vai refletir pouco porque a quantidade de luz de frat que vai até os nossos olhos é muito pequena e aí estes Anéis vão tratar de alterar a fase da luz ou seja ela sofreu uma mudança de angulação E aí quando passa por esses Anéis ela retorna a angulação em relação à luz de fundo olha aqui ó ela sofreu essa mudança de angulação e quando passa por esses Anéis ela retorna aqui ao mesmo ângulo que a luz de fundo se encontra E aí a percepção da imagem a visualização da imagem aumenta o contraste porque

sempre o traste tem a ver muito em relação à luz refletida ela só reflete quando entra em contato com a amostra e se dispersa muito bem e quando chega nesse ponto nós temos um outro filtro aqui que vai diminuir a amplitude da luz que vai passar para chegar até os nossos olhos quando nós temos essa diminuição da amplitude nós aumentamos muito mais o contraste porque nós diminuímos a intensidade da luz de fundo e com isso aumenta a capacidade do contraste de visualização da imagem que nós estamos projetando aqui no microscópio Então veja basicamente o microscópio

de contraste de fase se baseia em direcionar a luz difratada para os nossos olhos ela não se perde ela é difratada utilizando Anéis próximo objetiva né para poder direcionar a luz e alterar a fase da Luz difratada falando desse jeito parece que a gente não consegue entender muito bem o resultado da visualização no microscópio de contraste de fase Mas se a gente olhar a gente vê Exatamente isso então aqui do lado esquerdo nós temos uma figura de uma imagem sem o contraste de fase quando nós aplicamos o contraste ou seja mudamos a fase da Luz

de ratada para ela ir até os nossos olhos veja que nós conseguimos observar com muito mais detalhes a nossa amostra veja que ela escurece em relação a essa outra amostra e aumenta a quantidade de contraste Tá ok então esse é o mecanismo de funcionamento do microscópio óptico de contraste de fase veja que a gente tem uma qualidade de observação da imagem muito maior se ela não for corada em relação ao sem contraste beleza e para encerrar falar das aplicações obviamente as principais aplicações deste microscópio é observar os processos celulares de estruturas vivas muitas vezes a

gente quer observar A fagocitose de uma célula então para observar isso a célula tem que estar viva Mas se nós não utilizarmos o processo de contraste das fases da Luz nós não vamos ter um contraste adequado e a imagem vai ficar muito brilhante a gente não vai conseguir enxergar aquela amostra Viva Por isso que a gente precisa do microscópio de contraste de fase para enxergar células e estruturas vivas extremamente delgadas que não estão coradas Beleza então é isso aí essa foi a referência que eu utilizei para essa aula espero que vocês tenham gostado se vocês

gostaram peço que deem joinha me ajudem a compartilhar o vídeo quanto mais os senhores compartilharem mais a escola de ciências da vida cresce aqui no YouTube e mais os senhores me ajudam também e ajudam outras pessoas que acompanham a escola de ciências da vida se vocês quiserem participar se inscreva aqui no YouTube e participem lá da página do grupo da escola de ciências da vida no Facebook beleza pessoal como sempre no descritivo do vídeo tá todas as informações aí para acessar a página o grupo e o meu Facebook particular é isso aí forte abraço a

todos fiquem com Deus e até o próximo vídeo se Deus quiser