#4 Curso HPLC - quantificação - UPLC, UHPLC

a aula animação 3d a ser apresentada trata sobre a quantificação de um alimento em uma da mostra como apresentado nos últimos vídeos é possível realizar a separação de paracetamol cafeína e ácido acetilsalicílico utilizando o modo isso o crat kuê fase reversa com metanol e água como fase móvel já para a quantificação destas espécies é necessário que a intensidade do sinal da amostra seja comparada com o sinal de alguns padrões de concentrações conhecidas assim preparou-se cinco soluções padrão para que a comparação e quantificação sejam realizadas a primeira destas soluções é composta por um miligrama por litro

de cafeína 5 miligramas por litro de ácido acetilsalicílico e 5 miligramas por litro de paracetamol para a segunda solução estas concentrações foram dobradas já para soluções seguintes as concentrações foram incrementadas até que no quinto vaiou preparou-se uma solução contendo 20 miligramas por litro de cafeína 60 miligramas por litro de paracetamol e 60 miligramas por litro de ácido acetilsalicílico resumindo a concentração de cafeína é então variada e 1 a 20 miligramas político enquanto para acertar mall e ácido acetilsalicílico possuem concentração variando de 5 a 60 miligramas político com os padrões já preparados podemos colocá-los no interior

do egito automático e proceder uma por uma as determinações quando se possui um número maior de amostras é possível programar um injetor para realização das corridas automaticamente assim basta selecionar as soluções a serem submetidas a determinação além do método de análise de parâmetros como o volume de injeção e outros realizadas as corridas da amostra e dos cinco padrões pode se então pelo tratamento dos dados para a quantificação sobre pontos de cada um dos cronogramas dos padrões fica nítido que a intensidade dos picos é aumentada sempre que um padrão de maior concentração é utilizado sobreposto também

o cronograma da amostra vemos que o sinal dos analistas se encontram entre os sinais do padrão de menor e de maior concentração além da necessidade de realização de réplicas e validação de um método analítico para que resultados confiáveis sejam obtidos é importante que este parâmetro seja também atendido isso porque fora da faixa compreendida pelos padrões não se pode afirmar qual o comportamento a ser obtido assim caso haja perda de linearidade ou algum outro problema se a amostra não está sendo comparada com padrões de concentrações próximas erros podem estar sendo introduzidos na medida agora que sabemos

que a diluição ao qual a amostra foi submetida à deco se a curva de calibração podemos passar para a etapa de integração dos picos como exemplo o abrir o cronograma da amostra e realizar manualmente a sua integração após definição de cada um dos picos posso solicitar ao programa que apresente os dados de integração na tabela apresentada é possível visualização dos dados de área assim como tempo de retenção e altura para os três picos já identificados realizando-se esse procedimento de forma automática para todos os padrões é possível também programar o software para que os cálculos de

quantificação sejam realizados automaticamente como exemplo porém ele obterá tabela de um dos picos realizar o tratamento dos dados manualmente para simplificar o entendimento irei utilizar o programa excel para pilotar os dados em um gráfico do tipo x 1 nesta tabela são apresentados os dados de integração do pico do paracetamol para todos os cinco padrões avaliados como vemos tanto à altura como a área do pico são incrementados conforme aumenta se a concentração de pequim eo até e cinco para a quantificação pode utilizar tanto a área quanto à altura de um pico utilizando se por exemplo os

dados de área é possível notar se a curva analítica ou de calibração e obter se á sua equação como visto gráfico apresenta se linear para o paracetamol e portanto o ajuste também linear pode então ser utilizado com a equação da reta e os dados da amostra é possível agora se determinar a concentração de paracetamol na solução do problema sabendo se então a massa de amostra e o volume é o qual esta foi solenizada pode-se então calcular a massa de paracetamol contida no comprimido submetido à análise para quantificação dos demais analitos basta que este procedimento seja

repetido para cada um dos demais picos espero que vocês tenham gostado e que também assistam os próximos vídeos e sugestões dúvidas e críticas construtivas são bem vindas por favor deixem seus comentários [Música]