S03_V01 - Espectrofotometria e Curva padrão

e para preparar a nossa solução padrão de Albumina precisamos 500 mg de Albumina em seguida adicionamos água até obter um volume final 10 ml de solução e em seguida preparamos soluções com concentrações crescentes do padrão de albumina o e adicionamos o reagente de biureto que será utilizado para detectar a Albumina no nosso ensaio percebam que todos os tubos ainda possuem a mesma coloração OK agora nós levaremos os tubos para o banho-maria onde será feito em no incubação de 15 minutos para em seguida fazemos a quantificação pelo método na espectrofotometria Este é um espectrofotômetro que utilizaremos na nossa análise então de forma bem simples este equipamento ele possui uma fonte de luz interna aqui nessa mais ou menos nessa altura essa fonte de luz vai emitir radiação policromática e em seguida Eu tenho um monocromador para que eu consiga ajustar o comprimento de onda Ok portanto transformando-nos policromática em luz monocromática E então percebo que se a gente colocar um anteparo antes do detector como um papel branco qualquer à medida que a gente vai girando esse botão e ajustando o comprimento de onda percebam que a gente vai vendo as diferentes faixas do espectro do visível o que a luz vermelha Só passando para verde o azul e assim por diante é e em seguida essa luz monocromática vai atravessar a minha mostra tá que vai estar contida dentro desta cubeta então vou ter um espaço específico aqui para colocar a cubeta para que a luz monocromática possa atravessar minha mostra E aí posterior à ao local da cubeta eu voltei aqui nessa parede posterior o detector do meu espectrofotômetro que vai medir a quantidade de luz que foi transmitida Ou seja a quantidade de luz que conseguiu atravessar a amostra atravessará Cometa e chegar até o detector é e Após os 15 minutos de incubação a gente percebe que que é uma mudança gradativa na coloração dos tubos do azul claro passando do roxo Então essa mudança na com ela reflete a mudança gradativa na concentração de Albumina ao longo dos tubos um até um tudo seis agora a gente vai medir no espectrofotômetro tá essa variação quantitativa na concentração eu peço que vocês registrem os valores de absorbância que o espectro vai detectar para que a gente possa posteriormente fazer uma curva padrão utilizando esses valores A então vamos começar com muito boooom E aí e eu vou passar e o conteúdo do tubo para mim Cometa e eu já mostrei um comprimento de onda para 545 nanômetros e é utilizado para esse ensaio agora conheceria comida e ó e aqui vem um procedimento importante o tubo 1 e a gente não adicionou Albumina ou seja é um tubo que não contém o analistas e medito portanto a concentração de Albumina no tubo um ela é igual a zero Então por definição a gente vai dizer que a absorbância nesse tubo tem valor igual a zero e a gente faz isso zerando o equipamento então a gente ao apertar esse botão a gente vai arbitrariamente definir esse valor de absorbância muito um como o valor Zé e a partir daí os próximos tubos a notícia os valores medidos tendo como referência essa absorbância do túmulo que a gente definir cruza a sua voz e disse que é o nosso branco 20 agora a gente vai tudo o gordo hoje e o que foi isso o valor de absorbância zero. 116 e em seguida e vamos para o tubo 3 E aí E aí o valor de absorbância 10. 222 em e o próximo tu era alto gu4 e cujo valor de absorbância 10.

325 e agora vamos parar o penúltimo tubo que é o tipo dos cinco e os valores de absorbância e 10. e 423 o e finalmente o último tudo E aí e o tubo de maior concentração que que é o tipo C O que teve um valor de absorbância de zero.