Aula #10 - Extração e Caracterização do Amido

o Olá pessoal tudo bem na aula de hoje nós vamos falar sobre uma classe de moléculas quer diferente das que a gente tem visto nas últimas aulas mas vamos começar a falar sobre carboidratos Mais especificamente sobre polissacarídeos vocês vão ver hoje como nós vamos fazer a extração EA caracterização do amido mas também vamos ver duas Nações que geram Cor na presença de carboidratos sendo que uma delas é específica para detecção de amido em solução mas também vamos ver como é possível realizar o isolamento EA purificação de polissacarídeos utilizando reações de precipitação como sempre acompanha os

protocolos através do livro didático ou do material disponibilizado pelo seu professor não esqueça de fazer as suas anotações e uma boa aula todos E aí é muito bem pessoal antes a gente fazer os nossos experimentos nós precisamos falar um pouquinho sobre estrutura de carboidratos Mais especificamente sobre a estrutura do que a gente chama de amido O amido na verdade é uma mistura de dois polissacarídeos amilose e amilopectina Ambos são homopolissacarideos ou seja são formadas apenas por unidade de glicose amilose é um polissacarídeo linear uma vez que as unidades de glicose estão ligadas apenas por ligações

glicosidicas do tipo Alfa 14 mas amilopectina é um homopolissacarídeo ramificado que além da cadeia principal que contém glucose e ligações do tipo Alfa 14 também contém ligações glicolíticas do tipo aos 16 ra Mexicano as cadeias principais aproximadamente A cada 30 unidade de glucose O amido está presente nas células vegetais como um polissacarídeo de reserva e normalmente está presente na forma de grânulos insolúveis é possível vê-los através de microscopia óptica utilizando uma das reações de coloração que nós vamos ver daqui a pouco já e encontra-se sem solução amilose assumir uma conformação helicoidal que não tem nada

a ver com as estruturas de alfa-hélice das proteínas nessa estrutura helicoidal cada volta na molécula linear da amilose tem aproximadamente 6 moléculas de glicose já amilopectina quando em solução é uma molécula amorfa ou seja não apresenta uma estrutura definida especula-se que as porções de amilopectina que possuem glucose ligada por ligações glicosídicas do tipo aos 14 possam tentar assumir alguma conformação helicoidal mas a manutenção dessa estrutura é desestabilizada devido à presença das ramificações em ligações do tipo aos 16 nós podemos utilizar uma solução que é uma mistura de iodo molecular e iodeto de potássio que nós

chamamos de reativo de lugol iodo presente no reativo de lugol quando na presença de amido Mais especificamente quando na presença de amilose é capturado pelas hélices formadas por esse polissacarídeo de uma molécula de amilose tiver seis ou mais voltas completas formando uma hélice a publicação do iodo essas eles vai fazer com que essas moléculas sejam alinhadas no mesmo plano o que vai gerar uma cor azul bastante intensa e bastante característica do reativo de lugol na presença de amido se depois das moléculas de iodo serem capturadas pelas hélices da amilose de alguma forma estrutura helicoidal da

amilose for desfeita essas moléculas de iodo serão liberadas e a cor azul também será desfeita é importante dizer que o reativo de lugol é utilizado especificamente para detecção de amido numa solução ele não detecta nenhum outro tipo de polissacarídeos para detectar a presença de outros tipos de carboidratos ou outros podem sacar em solução nós podemos utilizar uma outra reação que também gera um composto colorido estou falando da reação de moles a reação de mole esse da quando nós colocamos uma solução que contêm polissacarídeos ou outros carboidratos na presença de um ácido forte concentrado a drástica

diminuição do PH vai fazer com que as ligações glicosídica sentry as unidades que formam polissacarídeo ser e usadas e o monossacarídeos Livres em solução serão desidratados pela presença do ácido para formar corporal ou metil hidroxi furfural esses produtos furicos por sua vez são capazes de condensar com o alfa naftol que o composto que forma o Regente demora e que vai gerar outro composto que tem cor violeta antes a gente fazer essas duas reações na prática é importante reforçar que cada uma delas tem sua própria característica na detecção de carboidratos o reativo de lugol formado por

iodo e iodeto de potássio nada mais é do que uma complexação com as moléculas da amilose EA específico para detecção de amido na solução já para detecção de qualquer polissacarídeo até mesmo para detecção de óleo sacarídeos o mesmo monossacarídeos Livres em solução nós usamos o reativo de moles que vai promover a Hidrólise dos polissacarídeos a desidratação dos monossacarídeos liberados EA reação de condensação com o alfa naftol para gerar um novo composto que vai ter uma cor característica e sabendo disso nós podemos então ver na prática como é que essas reações funcionam mas antes nós precisamos

obter uma solução que tenha amido solúvel Então vamos limpar bancada ver como é que a gente vai fazer isso muito bem pessoal então antes de realizar os nossos experimentos de caracterização do amido propriamente dito nós precisamos ter uma mostra que contenha esses polissacarídeos amilose E amilopectina para isso nós vamos extrair direto de uma fonte rica em amido que é uma batata esse processo de extração é bastante simples basta a gente o pegar um pedacinho de batata o que raspar com ajuda de um raspador nesse caso eu tô usando uma lâmina de vidro mas pode ser

qualquer outro material e a gente vai raspar um pedacinho dessa batata de dentro desse Becker um pontinho não precisa ser muita coisa essa quantidade já tá mais do que suficiente é o que eu vou fazer aqui agora é colocar 50 ml de água destilada nesse Becker aproximadamente não precisa ser um valor é muito exato E aí e nós vamos agitar bastante e com o auxílio de um bastão de vidro e vamos agitar vigorosamente e para liberar os grânulos de amido que são nas células aqui da batata e pronto aí já tá bom E aí a

próxima etapa vai ser filtrar esse material utilizando uma gaze um funil e uma gaze bem simples só para tirar os pedaços de batata aqui dessa solução então e vamos filtrar e pronto E aí E aí E aí a essa solução agora pessoal contém os grânulos de amido insolúveis em água fria ou seja vocês já viram que o amido é encontrado em grânulos né dentro das células vegetais e eles são insolúveis em Água Fria Então nós vamos deixar ele aqui uns 10 minutinhos parado em cima da bancada para que esses grânulos de cantem para que eles

afundem e daí a gente retira o sobrenadante e vai pegar só os grânulos de amido do fundo Então vamos aguardar uns 10 minutinhos aqui o ok então passado mais ou menos uns dez minutinhos os nossos grânulos de amido já de cantaram no fundo aqui não sei se vocês vão conseguir ver Ah mas daqui a pouco vocês vão ver o que eu vou fazer agora é com muito cuidado verter o sobrenadante e aqui nesse outro béquer para que os grânulos de amido Fiquem lá no fundo E aí do béquer que a gente precisa Então olha aqui

pessoal agora acho que vocês conseguem ver melhor estão vendo que tem consulta uma areia no fundo do béquer Esses são os grânulos de amido tão vendo são os grânulos de amido insolúvel Oi ok bom então o que nós precisamos fazer é transformar esses grânulos de amido que estão insolúveis em uma solução de amido solúvel para isso eu vou pegar esses grânulos que estão insolúveis e vou de diluir em 50 ml de água fria há 50 ml de água fria e eu já deixei pronto aqui um pouco de água destilada aquecida Então ela já foi aquecida

mais ou menos 90 graus e a gente vai fazer o seguinte sob agitação já deixei preparado aqui o agitador magnético o pão deixar essa solução agitando e eu vou adicionando aos poucos 50 ml de água quente a essa solução bom então a gente já tinha 50 ml de água fria tô colocando 50 ml de água servida praticamente e isso vai fazer com que os grânulos de amido sejam dissolvidos e que a gente tem uma solução opalescente é uma solução opalescente é uma solução perolada É como se você tivesse cozinhando arroz quem já cozinhou arroz aí

sabe como é que é uma solução opalescente aquela água do Arroz mês branquiçada meio cor de pérola e é uma solução desse tipo e vamo colocar aqui mais 10 ml de água quente Oi e deixar agitando até que a essa solução esses grânulos de amido se tornem uma solução Ou seja que os amigos que o amido não amilose amilopectina fica insolúveis na água e vamos esperar uns minutinhos então é muito bem pessoal passados alguns minutos da nossa solução aqui em agitação na água quente nós podemos desligar aqui o equipamento e vocês vão ver aqui nós

temos agora uma solução opalescente consegue perceber como é que ela é característica dela e ela é meio perolada significa que os nossos grânulos de amido foram dissolvidos e agora estão solúveis na água e essa solução que nós vamos utilizar então para os nossos experimentos uma solução de amido solúvel primeira coisa que nós vamos fazer são os dois testes colorimétricos né os dois testes de cor detecção por cor que a gente já falou teste do lugol e o teste de molish eu vou fazer primeiro a reação de moles que leva uns 2 3 minutinhos para ver

o resultado depois a gente faz a reação do lugol então para fazer a reação de moles O que que a gente vai usar 2 ml da solução de amido que a gente acabou de solubilizar 12 ml da solução de amido 3 gotas do reativo de moles que o alfa naftol e três gotinhas a gente agita a homogenizar um pouquinho e eu vou colocar aqui 2 ml de ácido sulfúrico concentrado sem que esse ácido sulfúrico se misture a solução ou seja vou botar ele pela borda do tubo com bastante cuidado para que ele e vá para

o fundo do tubo uma vez que eu acho sulfúrico é mais denso do que a água Tom com cuidado pela borda do tubo como colocar 2 ml de ácido sulfúrico concentrado é isso consegue ver que formou uma fase né o ácido sulfúrico foi profundo que é mais denso a e agora nós vamos deixar é esse tubo quietinho aqui por Um Dois Três minutinhos até a gente fazer a outra reação do Google é bom para fazer a reação de detecção de amido utilizando o reativo de lugol é muito simples mas vamos pegar 2 ml da solução

de amido nós preparamos nós vamos colocar três gotas do reativo de lugol iodo e iodeto de potássio solução de lugol então três gotinhas Que hora que tu vai acontecer o verão solução ficou com um azul bem forte E aí O que significa que nós temos com certeza nessa solução amido ou amilose já que ao reativo de lugol Deu positivo né Lembrando que o iodo as moléculas de iodo vão ser capturadas pela estrutura helicoidal da amilose e vão dar essa coloração essa coroa coloração característica Olá a todos sabemos como a reação positiva do lugol que nós

Com certeza temos amido temos polissacarídeo na forma de amido na solução já a reação positiva para o relativo the moorish é caracterizada pela observação deste anel de cor roxa cura na interfase da solução consegue observar bom então ali entre a o ácido sulfúrico que está no fundo e a solução de amido está em cima solução aquosa de amido a gente tem a Hidrólise dos polissacarídeos a geração de furfural pela desidratação das Episodes e a reação com Alpha não estou com reativo de moles para formar esse composto de Cor Púrpura que é um indicativo de reação

positiva E lembrando que o reativo de morte não é específico para amido detecta qualquer polissacarídeo qualquer carboidrato na solução e o lugol vocês já sabem a específico apenas para amido apenas para a meiose porque depende da estrutura helicoidal da molécula e o que nós vamos fazer agora pessoal é pegar esse tubo aqui que a gente fez o teste do lugol e nós vamos aquecer esse tubo a 100 graus por alguns minutos para ver o que acontece Tá então vamos colocar esse tudo no banho-maria 100 graus para ver o que que vai acontecer com essa reação

aqui Hoje nós estamos aqui com nosso banho-maria a 100 graus Vamos colocar a nossa solução que a gente fez o teste do Google para aquecer durante uns minutos a nossa intenção é ver o que que o calor vai fazer com a estrutura do amido e consequentemente qual vai ser a consequência né com a reação do lugol Então vamos deixar ele um minutinhos aí a gente já vai ver o resultado o ok pessoal tão passado alguns minutos aqui no banho-maria 100 graus mover o que que aconteceu com a nossa solução de amido com lugol perceberam que

ela perdeu aquela coloração Azul intensa é que ela tinha então nós aumentamos a energia térmica da solução O amido perdeu a sua estrutura helicoidal e liberou as moléculas de iodo consequentemente E isso gerou a perda de cor vamos ver o que que acontece quando a gente resfria de novo esse tubo então para fazer isso eu vou simplesmente jogar a água fria né água em temperatura ambiente aqui nesse por fora desse tudo para resfriar a solução e vamos ver o que que acontece então presta atenção aí em novembro E aí bom então mesmo uma vez diminuir

a temperatura e o amido tem a capacidade de retomar sua estrutura helicoidal e consequentemente captura novamente aquelas moléculas de iodo que estavam aqui na solução e a cor volta o ok então aí seu princípio de funcionamento do da detecção de amido pelo reativo de lugol é muito bem pessoal então para segunda parte da sala nós vamos ver dois procedimentos que permitem que a gente precipite polissacarídeos em solução agora que nós já temos o nosso a nossa Janeiro solúvel nós vamos utilizar uma solução de sulfato de amônio saturada para precipitar esse amido da solução você já

viram como Esse princípio funciona na nossa aula de caracterização de proteínas sulfato de amônia um sal bastante grande e volumoso que rouba a água de solvatação dos polímeros ou seja ele retira a água que está solubilizando outras moléculas para se solubilizar fazendo com que estes polímeros podem ser proteína ou polissacarídeo precipitem em solução já quando nós adicionamos um solvente orgânico a solução Como por exemplo o álcool etílico nós estamos diminuindo a constante dielétrica do Meio ou seja nós estamos tornando a solução mais Apolar sabendo que os polissacarídeos em geral são moléculas bastante polares uma vez

que são formados por monômeros que são poliidroxialdeídos ou poliidroxicetonas portanto que contém muitos grupo tu viu a nossa estrutura a diminuição da polaridade do meio vai dificultar a formação de Pontes de hidrogênio entre esses grupos hidroxila e as moléculas de água fazendo com que as moléculas fiquem insolúveis na solução então vamos voltar depois bancada e ver como que o amido é precipitado pela adição de sulfato de amônio e também pela adição do etanol tons estamos de volta aqui a bancada para segunda parte do nosso experimento O que nós vamos fazer agora são duas reações de

precipitação de polissacarídeos ou da precipitação do amido que nós já temos a nossa solução pronta aqui o que que eu vou fazer eu vou pegar 5 ml dessa solução de amido vou colocar em cada um desses tubos e vou adicionar nesse tubo aqui 5 ml de solução de sulfato de amônio e nesse outro tubo eu vou adicionar 5 ml de álcool etílico etanol Tá então vamos ver o que acontece a menina E aí E aí e Prontinho pessoal então vamos agitar os tubos para homogenizar a concentração dessas Soluções 15 ml de solução de amido e

5 ml de sulfato de amônio neste tubo e nesse outro tulo 5 ml de solução de amido e 5 ml de álcool etílico consegue ver que a solução já tá meio opaca né as duas já estão meio opacas ou seja estão precipitando os polissacarídeos para explicando amilose e amilopectina nesses dois todos vão deixar esses tubos aqui por uns 10 minutinhos para eles precipitarem bem e daí a gente já vai e filtrar essas duas soluções é porque pessoal então passado o tempo necessário para precipitar os polissacarídeos você já conseguem ver que nós temos uns floquinhos aqui

dentro do tubo dos dois tubos conseguem ver ó esse aqui eu te dá para ver melhor tão vendo que formou um flocos e isso é o polissacarídeo precipitado Vocês já viram entretanto aqui tanto O sulfato de amônia quanto o etanol precipitam proteínas a gente já viu isso nas aulas passadas como é que a gente sabe que o que está precipitado aqui não são proteínas provenientes do nosso extrato da batata Ou em vez dos polissacarídeos né ao invés do amido para fazer isso nós vamos filtrar essa solução e testar com lugol que é específico para detecção

de amido a presença de amido no que tá filtrado e não que vai ficar retido no filtro Então vamos filtrar essas duas soluções para isso eu vou pegar aqui dois outros tubos um para o filtrado do sulfato de amônio e um que eu filtrado do etanol e nós vamos pegar aqui um funil é um papel de filtro para cada um E vamos filtrar as suas Soluções e nós vamos lá ó E aí E aí E aí e vamos esperar um pouquinho para filtrar o material e daí vamos fazer o teste no que está filtrado e

no que ficou retido em cada uma das situações aqui o que pessoal então agora que nós já filtramos as duas soluções vamos testar tanto o eluído é o filtrado quanto o que ficou retido no filtro com reativo de lugol para a gente detectar a presença de amido então primeiro vamos fazer e o tubo que foi precipitado com Sulfato de amônia e Primeiro vamos colocar no ido no filtrado três gotinhas de lugol em pó percebam que o tubo ficou a laranja nós ficou da cor do iodo ou seja não ficou azul significa que essa é uma

reação negativa para a presença de amido Não tenha medo nessa solução aqui que foi precipitada com Sulfato de amônio e filtrada vamos ver se tem amido no material que ficou retido no filtro nós podemos fazer o teste direto no filtro ou três gotinhas de lugol E aí e consegue perceber que ficou azul significa que o amido ficou precipitado e retido no filtro então sulfato de amônia funcionou para precipitar O amido e insolubilizar esses polissacarídios eles não ficaram presentes na solução filtrada não ficaram presentes no ido vamos fazer o mesmo teste com a solução que a

gente precipitou com etanol então primeiro e no eluído ou três gotinhas de Google no filtrado da precipitação é canônica percebam que deu uma reação negativa para a presença de amido ou seja não tenha medo nessa solução bom e vamos fazer agora o mesmo teste e no material que ficou retido o percebe conseguem ver que ficou azul ou seja o amido que foi para espetado ficou retido no filtro e o etanol dizendo né para gente que o etanol também é eficiente na precipitação desses polissacarídios desses polímeros antes de me despedir de vocês eu gostaria de dar

uma dica Por que vocês não esqueçam como funciona a reação do lugol você pode usar os princípios que você aprender nessa aula quando você for naquela formatura naquela festa no seu primo que tem whisky falsificado sabe normalmente os falsificadores de bebida colocam doenças que fosse ficado iodo molecular tá daquela cor característica que ele Amarelo alaranjado típico de um uísque se você tiver desconfiada que aquele whisky na festa do seu primo não é de boa procedência você pode pegar um pedacinho de miolo de pão e molhar na bebida se o miolo do pão que contêm amido

ficar azul significa que o whisky falsificado ou seja tem outro naquela bebida e vai te dar a maior dor de cabeça obviamente Essa não é a um e são onde nós utilizamos e outro para detectar amido o nesse caso utilizamos amido para detectar e outro na bebida mas na minha opinião é uma das mais importantes Então por hoje era isso pessoal não esqueça de levar aquele miolo de pão no seu bolso na sua próxima festa de formatura e até a próxima E aí